幾種新型重組葡萄球菌腸毒素生物功能的研究.pdf

1、葡萄球菌腸毒素(Staphyloccucal enterotoxins，SEs)主要是由葡萄球菌產(chǎn)生的一類(lèi)結(jié)構(gòu)相關(guān)、毒力相似的可溶性胞外毒蛋白，可引發(fā)急性腸胃炎及其它免疫性疾病。已發(fā)現(xiàn)的腸毒素及腸毒素樣基因型共20余種，但有關(guān)新型腸毒素的研究主要停留于基因型檢測(cè)水平。本課題主要研究了幾種新型重組腸毒素的毒性和超抗原活性，并初步探討了蛋白分子結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系。
　　 應(yīng)用構(gòu)建的pET28α-ses重組載體經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、鎳鰲合層析

2、純化，獲得高純度且具有活性的重組蛋白SEA-HIS、SEO-HIS、SEG-HIS、SEK-HIS、SEU-HIS、和SEQ-HIS。將4周齡小鼠平均分成15組，每組7只，尾靜脈注射20μg/g和5μg/kg的六種重組蛋白和天然SEA，以PBS做空白對(duì)照，72h后取胸腺、脾臟和肝臟。計(jì)算臟器指數(shù)并檢測(cè)肝臟外源化合物代謝酶活性及IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ幾種細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)水平。應(yīng)用于體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步評(píng)價(jià)腸

3、毒素對(duì)T細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄、表達(dá)的影響。利用origin7.5獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)法分析腸毒素處理組與PBS對(duì)照組差異的顯著性。
　　 在20μg/g至毒劑量下，SEA-HIS、SEQ-HIS能下調(diào)體內(nèi)Th1類(lèi)細(xì)胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2類(lèi)細(xì)胞因子(IL-4、IL-6)的轉(zhuǎn)錄水平，SEK-HIS、SEG-HIS和SEO-HIS能上調(diào)炎性因子IFN-γ。A、O、G、K、Q型腸毒素均能影響肝臟POD、SOD、GSH-

4、PX、LDH的活性，上調(diào)TNF-α的轉(zhuǎn)錄水平，在50μg/mL劑量下誘導(dǎo)體外T淋巴細(xì)胞凋亡。
　　 在4μg/mL劑量下，四種新型重組腸毒素(K、Q、G、O型)與經(jīng)典天然SEA相似，刺激體外T淋巴細(xì)胞增殖，具有超抗原活性，且超抗原活性強(qiáng)弱與T細(xì)胞TCR的Vβ亞型和MHCⅡ分子有關(guān)。按促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖能力的強(qiáng)弱排序，腸毒素的超抗原活性由強(qiáng)至弱的順序?yàn)椋篕、Q、A、G、O，U型腸毒素不表現(xiàn)超抗原活性，這與根據(jù)蛋白分子α3-β8環(huán)及

5、Zn離子結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合能力所預(yù)測(cè)的超抗原活性強(qiáng)弱順序一致。在5μg/kg體內(nèi)劑量和4μg/mL的體外劑量下，A、O、G、K、Q型腸毒素均能促進(jìn)IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。
　　 綜上所述，重組葡萄球菌腸毒素可引起機(jī)體肝臟外源化合物代謝酶的變化，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，具有一定的肝臟毒性；A、O、G、K、Q型腸毒素具有差異化影響機(jī)體細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄，淋巴細(xì)胞分化的能力，表現(xiàn)出不同的超抗原活性。新型葡萄球菌腸毒