表皮葡萄球菌RP62A中sigB基因調(diào)控生物膜合成的研究.pdf

1、sigB基因編碼的SigmafactorB(SigB，或oB)蛋白是一個普遍性的通過與RNA聚合酶核心酶結(jié)合調(diào)控多種基因表達的因子。在葡萄球菌中，sigB基因?qū)ι锬さ挠绊懯遣皇峭ㄟ^直接調(diào)控與生物膜形成相關(guān)的基因sarA從而間接控制icaADBC基因簇的并不清楚。結(jié)合生物信息學和此前的報道，分析發(fā)現(xiàn)SigB可能通過識別并結(jié)合到存在于sara基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的Pl啟動子中的一致序列GATATA．15bp-GGGTAT實現(xiàn)對sara的調(diào)控。在

2、表皮葡萄球菌RP62A中，采用雙交換同源重組的方法在該基因中插入四環(huán)素抗性標記實現(xiàn)sigB定位突變，使之失活，實現(xiàn)基因敲除。通過抗性標記，PCR分析，DNA測序等多種方式證實基因敲除的可靠性和穩(wěn)定性。sigB基因敲除后的菌株，與出發(fā)菌相比生物膜形成能力急劇下降，而在sigB基因座的回補菌株中，生物膜形成能力回復到接近出發(fā)菌的水平。RT—PCR分析發(fā)現(xiàn)sigB基因從轉(zhuǎn)錄水平上正調(diào)控生物膜相關(guān)基因sara，icaA(ica操縱子的第一個結(jié)構(gòu)

3、基因，生物膜形成的關(guān)鍵基因)。為深入探討sigB基因?qū)ara的調(diào)控機理，采用lacZ報告基因證實SigB因子是通過與sara的啟動區(qū)相互作用直接調(diào)控sara。在表皮葡萄球菌中，已證實sara基因能夠直接正調(diào)控icaADBC操縱子的轉(zhuǎn)錄。因此，sigB基因通過正調(diào)控sara基因間接影響ica操縱子的表達，從而影響生物膜的形成。另外，根據(jù)在金黃色葡萄球菌中的報道，sigB基因能夠從轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控許多生物膜和毒素相關(guān)基因，在表皮葡萄球菌RP