表皮葡萄球菌RP62A中sigB基因調(diào)控生物膜合成的研究.pdf

1、sigB基因編碼的SigmafactorB(SigB，或oB)蛋白是一個(gè)普遍性的通過(guò)與RNA聚合酶核心酶結(jié)合調(diào)控多種基因表達(dá)的因子。在葡萄球菌中，sigB基因?qū)ι锬さ挠绊懯遣皇峭ㄟ^(guò)直接調(diào)控與生物膜形成相關(guān)的基因sarA從而間接控制icaADBC基因簇的并不清楚。結(jié)合生物信息學(xué)和此前的報(bào)道，分析發(fā)現(xiàn)SigB可能通過(guò)識(shí)別并結(jié)合到存在于sara基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的Pl啟動(dòng)子中的一致序列GATATA．15bp-GGGTAT實(shí)現(xiàn)對(duì)sara的調(diào)控。在

2、表皮葡萄球菌RP62A中，采用雙交換同源重組的方法在該基因中插入四環(huán)素抗性標(biāo)記實(shí)現(xiàn)sigB定位突變，使之失活，實(shí)現(xiàn)基因敲除。通過(guò)抗性標(biāo)記，PCR分析，DNA測(cè)序等多種方式證實(shí)基因敲除的可靠性和穩(wěn)定性。sigB基因敲除后的菌株，與出發(fā)菌相比生物膜形成能力急劇下降，而在sigB基因座的回補(bǔ)菌株中，生物膜形成能力回復(fù)到接近出發(fā)菌的水平。RT—PCR分析發(fā)現(xiàn)sigB基因從轉(zhuǎn)錄水平上正調(diào)控生物膜相關(guān)基因sara，icaA(ica操縱子的第一個(gè)結(jié)構(gòu)

3、基因，生物膜形成的關(guān)鍵基因)。為深入探討sigB基因?qū)ara的調(diào)控機(jī)理，采用lacZ報(bào)告基因證實(shí)SigB因子是通過(guò)與sara的啟動(dòng)區(qū)相互作用直接調(diào)控sara。在表皮葡萄球菌中，已證實(shí)sara基因能夠直接正調(diào)控icaADBC操縱子的轉(zhuǎn)錄。因此，sigB基因通過(guò)正調(diào)控sara基因間接影響ica操縱子的表達(dá)，從而影響生物膜的形成。另外，根據(jù)在金黃色葡萄球菌中的報(bào)道，sigB基因能夠從轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控許多生物膜和毒素相關(guān)基因，在表皮葡萄球菌RP