近紅外光譜法在高通量分析還原型谷胱甘肽片理化性質(zhì)中的應(yīng)用研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文建立了一種運(yùn)用近紅外光譜法(near infrared spectroscopy,NIRS)結(jié)合偏最小二乘法(partial least squares,PLS)高通量、高選擇性測(cè)定還原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)片中雜質(zhì)氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)及片劑抗張強(qiáng)度(radial tensilestrength,RTS)的方法。為了建立和評(píng)價(jià)預(yù)測(cè)模型,采用優(yōu)化的測(cè)

2、量參數(shù),準(zhǔn)確測(cè)量了330片還原型谷胱甘肽片的近紅外漫反射和透射光譜。
  在GSSG或RTS的分析過(guò)程中,進(jìn)行了近紅外漫反射光譜(nearinfrared diffuse reflectance spectrum,NIR-DRS)和近紅外透射光譜(nearinfrared transmittance spectrum,NIR-TS)的篩選,校正集和預(yù)測(cè)集的合理篩分,采用化學(xué)計(jì)量學(xué)技術(shù)對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理。在選擇了建模光譜范圍和去除異常

3、光譜后,用最佳的主因子數(shù)建立模型。用校正集均方根誤差(root mean square error of calibration,RMSEC)、交叉驗(yàn)證均方根誤差(root mean square error of cross validation,RMSECV)、預(yù)測(cè)集均方根誤差(root mean square error of prediction,RMSEP)、校正集的相關(guān)系數(shù)(correlation coefficient o

4、f calibration,Rc)和預(yù)測(cè)集的相關(guān)系數(shù)(correlation coefficient of prediction,Rp)對(duì)所建模型的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明,所建立的近紅外分析模型性能優(yōu)良。因此可證明NIRS結(jié)合PLS可同時(shí)地、選擇性地、快速無(wú)損地分析還原型谷胱甘肽片中的雜質(zhì)GSSG的含量和片劑物理參數(shù)RTS,盡管片劑中主藥GSH的含量非常高,而雜質(zhì)GSSG的含量很低。此策略可作為對(duì)常用的藥物制劑中主要成分的近紅外光譜法在

5、線分析的一個(gè)重要補(bǔ)充,同時(shí)也擴(kuò)展了近紅外光譜法在高通量和高選擇性分析方向的運(yùn)用。
  目的:
  1.建立還原型谷胱甘肽片中主要雜質(zhì)GSSG含量的NIR-DRS快速測(cè)定法,用于質(zhì)量控制。
  2.建立還原型谷胱甘肽片物理參數(shù)RTS的NIR-DRS快速測(cè)定法,用于質(zhì)量控制。
  方法:
  1.還原型谷胱甘肽片近紅外光譜的測(cè)量
  將片劑一面放置于FT-NIR光譜儀的積分球附件檢測(cè)窗,用片劑漫透射采樣附

6、件調(diào)節(jié)片劑位置使固定于檢測(cè)窗中心,同時(shí)采集樣品的NIR-DRS和NIR-TS。然后,采用同樣的方式對(duì)片劑另一面進(jìn)行光譜測(cè)量。所有的光譜測(cè)量均采用下述測(cè)量條件。分辨率:8 cm-1;掃描次數(shù):64;掃描范圍:漫反射光譜10000-4000 cm-1,透射光譜10000-6000 cm-1;溫度:約25℃;濕度:(55±5)%RH。每次測(cè)量前掃描并扣除背景以避免空氣中水蒸氣和二氧化碳的影響。
  2.還原型谷胱甘肽片中GSSG含量參考

7、值的測(cè)定
  用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)測(cè)定,并按外標(biāo)法計(jì)算GSSG的含量參考值。色譜柱:C18柱(Phenomenex Gemini,250 mm×4.6 mm,5μm),柱溫:30℃,流動(dòng)相:甲醇-緩沖液(10 mmol/L庚烷磺酸鈉水溶液,50 mmol/L磷酸二氫鈉水溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)(4∶96,v/v),流速:1 mL/min,檢

8、測(cè)波長(zhǎng):210nm,進(jìn)樣量:20μL。根據(jù)ICH-Q2(R1)中分析方法的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。
  3.還原型谷胱甘肽片RTS參考值的測(cè)定
  用游標(biāo)卡尺測(cè)量每片樣品的直徑(t)和厚度(D),用片劑硬度測(cè)試儀測(cè)定每片樣品的硬度(F),然后根據(jù)公式(1)計(jì)算每片樣品的RTS參考值。RTS=2F/πDt(1)
  4.建立基于NIR-DRS的GSSG含量的PLS預(yù)測(cè)模型并對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證
  對(duì)NIR-DRS和NI

9、R-TS進(jìn)行選擇,然后合理的篩分校正集和預(yù)測(cè)集,采用化學(xué)計(jì)量學(xué)技術(shù)對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理。在選擇了建模光譜范圍和去除異常光譜后,用最佳的主因子數(shù)建立基于NIR-DRS的GSSG預(yù)測(cè)模型。用RMSEC、RMSECV、RMSEP、Rc和Rp對(duì)所建模型的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
  5.建立基于NIR-DRS的RTS的PLS預(yù)測(cè)模型并對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證
  對(duì)NIR-DRS和NIR-TS進(jìn)行選擇,然后合理的篩分校正集和預(yù)測(cè)集,采用化學(xué)計(jì)量學(xué)技術(shù)對(duì)光譜

10、進(jìn)行預(yù)處理。在選擇了建模光譜范圍和去除異常光譜后,用最佳的主因子數(shù)建立基于NIR-DRS的RTS預(yù)測(cè)模型。用RMSEC、RMSECV、RMSEP、Rc和Rp對(duì)所建模型的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
  結(jié)果:
  1.近紅外光譜的測(cè)量
  得到330片還原型谷胱甘肽片樣品的660張NIR-DRS和660張NIR-TS。
  2.氧化型谷胱甘肽含量參考值的測(cè)定
  GSH和GSSG的分離度符合要求。GSSG的濃度(0.44

11、-16.34μg/mL)和峰面積之間呈良好的線性關(guān)系,回歸方程A=16.85 C-0.823(A為對(duì)照品峰面積,C對(duì)照品濃度)R2=1。平均回收率為100.3%(n=9),RSD為1.3%。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明,HPLC可準(zhǔn)確測(cè)定GSSG的含量。
  測(cè)得186個(gè)還原型谷胱甘肽片樣品的GSSG含量參考值范圍為15.81-22.20 mg/g。
  3.抗張強(qiáng)度參考值的測(cè)定
  測(cè)得318個(gè)還原型谷胱甘肽片樣品的RTS參考

12、值范圍為270.76-1145.14kPa。
  4.GSSG預(yù)測(cè)模型性能評(píng)價(jià)
  最優(yōu)的GSSG預(yù)模型中,RMSEC、RMSECV和RMSEP分別為0.575、0.729和0.607 mg/g,Rc和Rp分別為0.9173和0.9182。預(yù)測(cè)集參考值和預(yù)測(cè)值呈良好的線性關(guān)系,回歸方程y=0.8614 x+2.6982。
  5.RTS預(yù)測(cè)模型性能評(píng)價(jià)
  最優(yōu)的RTS預(yù)測(cè)模型中,RMSEC、RMSECV和RMS

13、EP分別為58.2、61.3和69.0 kPa,Rc和Rp分別0.9393和0.9151。預(yù)測(cè)集參考值和預(yù)測(cè)值呈良好的線性關(guān)系,回歸方程y=0.8211x+113.3224。
  結(jié)論:
  所建方法可高通量無(wú)損快速地測(cè)定還原型谷胱甘肽片中主要雜質(zhì)GSSG的含量和片劑的RTS。所建模型具有低的預(yù)測(cè)誤差,以及較高的相關(guān)系數(shù)。表明NIR-DRS結(jié)合PLS可高通量選擇性的測(cè)定還原型谷胱甘肽片中低含量的GSSG和片劑的物理參數(shù)RTS

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