霉酚酸對(duì)IM-9B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IgG-IgM抗體的影響.pdf

1、目的：觀察B細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞后，不同濃度的MPA對(duì)漿細(xì)胞存活及抗體產(chǎn)生的影響，為臨床使用MMF抑制血型抗體反彈提供的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：①CCK8法觀察 MPA對(duì) B淋巴細(xì)胞的增殖抑制作用。設(shè)置0.03、0.3、3、30umol/L四個(gè)MPA濃度組及DMSO溶媒對(duì)照組、空白對(duì)照組，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定藥物分別作用24h、36h、48h后的OD值，繪制出抑制率與MPA濃度和作用時(shí)間關(guān)系圖；②選定最適MPA濃度，分別作用于B淋巴細(xì)胞后，顯

2、微鏡下觀察各組細(xì)胞的變化；③ELISA法檢測(cè)MPA對(duì)B淋巴細(xì)胞抗體產(chǎn)生的抑制效果。將相同濃度的細(xì)胞接種于6孔板上，待細(xì)胞濃度達(dá)到106后，使用PWN刺激B細(xì)胞3-5天待其轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞后，分別向各孔加入不同濃度MPA，及硼替佐米，4-6天后離心收集細(xì)胞上清液，ELISA法檢測(cè)各組細(xì)胞IgM、IgG表達(dá)量。④流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)漿細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率。將相同濃度的細(xì)胞接種于6孔板上，待細(xì)胞濃度達(dá)到106后，使用PWN刺激B細(xì)胞3-5天轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞后，分別

3、向各孔加入不同濃度MPA，及硼替佐米，作用4-6天后流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)處理后各組細(xì)胞 CD19（-）CD38（+）漿細(xì)胞的百分率；⑤PCR法檢測(cè)MPA對(duì)B淋巴細(xì)胞活化為漿細(xì)胞的影響。將相同濃度的細(xì)胞接種于6孔板上，待細(xì)胞濃度達(dá)到106后，使用PWN刺激B細(xì)胞3天轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞后，分別向各孔加入不同濃度MPA，及硼替佐米，作用4-6天后，PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)IMPDH2的表達(dá)情況；
　　結(jié)果：①M(fèi)PA對(duì)B細(xì)胞增殖有抑制作用，0.03u

4、mol/L的MPA抑制不明顯，30umol/L,隨著藥物濃度增大，B細(xì)胞存活率從81.7％（0.3umol/L）下降到61.2%（30umol/L），隨著時(shí)間增加0.3umol/L MPA組存活率從81.7%（24h）下降到64.15%（48h），30umol/L MPA組存活率從61.2%（24h）下降到38.79%（48h）；②MPA抑制漿細(xì)胞的IMPDH2表達(dá)；當(dāng) MPA濃度達(dá)到30umol/L時(shí)，IMPDH2表達(dá)明顯減少，而0.

5、3-3umol/L與對(duì)照組對(duì)比不明顯，硼替佐米組幾乎為0；③MPA可以降低CD19（-）CD38（+）漿細(xì)胞的存活率，0.3umol/L MPA組存活率為14.5%，而30umol/L MPA組存活率下降到8.2%；④IgG抗體產(chǎn)生隨時(shí)間變化與對(duì)照組比較，0.3umol-30umol/L（第四天）MPA組由396.9ug/mL減少到289.1ug/mL，較對(duì)照組494.1ug/mL明顯減少，0.3umol-30umol/L（第六天）MP

6、A組由986ug/mL減少到460ug/mL，較對(duì)照組2205ug/mL明顯減少，而低濃度 MPA對(duì) IgM產(chǎn)生影響不大,0.3umol/L（第四天）MPA組254.6ng/mL較對(duì)照組255.8ng/mL無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而3umol/L與30umol/L較對(duì)照組減少，由210.3ng/mL減少至190.7ng/mL，硼替佐米組122.7ng/mL較對(duì)照組明顯減少，第六天隨著MPA濃度增加，IgM產(chǎn)生量減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)