按摩對(duì)兔股四頭肌損傷修復(fù)的初步研究.pdf

1、目的：
　　研究兔股四頭肌經(jīng)外力重物損傷后，按摩對(duì)受損股四頭肌損傷修復(fù)的分子病理、形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，受損肌組織微循環(huán)重建，肌細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白-α-肌動(dòng)蛋白(α-Actin)和結(jié)蛋白(Desmin)的表達(dá)及細(xì)胞骨架重構(gòu)，骨骼肌能量代謝相關(guān)的酶活性影響，旨在探討按摩促進(jìn)骨骼肌組織損傷修復(fù)的生理、生化分子生物機(jī)制。
　　方法：
　　健康成年雄性新西蘭大白兔33只，體重(2.0±0.5)kg，隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組(N組，n=3

2、)、自然恢復(fù)組(SR組，n=18)和按摩組(M組，n=12)。根據(jù)造模后觀察時(shí)間的不同，SR組分為自然恢復(fù)7d組(SR7組，n=3)、自然恢復(fù)14d組(SR14組，即按摩7d對(duì)照組，n=6)和自然恢復(fù)21d組(SR21組，即按摩14d對(duì)照組，n=6)3個(gè)亞組；M組分為按摩7d組(M7組，n=6)和按摩14d組(M14組，n=6)2個(gè)亞組。N組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不作任何處理，作為正常對(duì)照；SR、M組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用自制打擊器制備兔右后肢股四頭肌損傷模型。

3、M組于造模后第8天用RT-N2智能按摩器行按摩治療，按摩轉(zhuǎn)速3000～3100r/min，按摩時(shí)間15min，每天1次至處死取材為止；SR組不予按摩，SR、M組于傷后14d及21d，用飛利浦iu22高端彩超診斷儀對(duì)受損的股四頭肌進(jìn)行常規(guī)和超聲微泡影像學(xué)檢查。隨后各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)空氣栓塞法處死，取股四頭肌組織樣本經(jīng)H&E染色觀察組織病理變化；免疫組織化學(xué)染色、Western Blot檢測(cè)Desmin、α-Actin表達(dá)，并觀察肌纖維骨架結(jié)構(gòu)

4、；酶組織細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)ATPase、SDH、AchE酶活性。隨機(jī)選取上述各組切片各5張，鏡檢照相，每組切片至少記錄10個(gè)視野評(píng)價(jià)損傷修復(fù)狀況、計(jì)數(shù)MEP；并選取100個(gè)肌纖維，NIS-Elements BR3，2圖像分析軟件測(cè)定肌纖維截面積與直徑；Image Pro Plus6.0圖像分析軟件測(cè)量并計(jì)算SDH深染Ⅰ型肌纖維目標(biāo)面積，SDH深染肌纖維、ATPase陽(yáng)性肌纖維積分光密度(OD)。數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差

5、(One-Way ANOVA)分析，多組之間均數(shù)的兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。組間差異采用t檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01差別具有顯著意義。
　　結(jié)果：
　　SR、M組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均存活至實(shí)驗(yàn)完成。N組肌纖維形態(tài)規(guī)整，排列整齊，無(wú)結(jié)締樣組織。SR組股四頭肌組織標(biāo)本見(jiàn)明顯組織壞死，多數(shù)肌肉纖維斷裂、萎縮、排列紊亂；M組骨骼肌組織形態(tài)、肌肉萎縮較SR組改善，受損部位可見(jiàn)新生肌細(xì)胞。超聲影像檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SR組受損股四頭肌

6、可見(jiàn)彌散、非均一的弱聲波反射，M組比SR組見(jiàn)明顯的功能性新生毛細(xì)血管形成、微循環(huán)的重建。酶組織化學(xué)染色顯示：各時(shí)間點(diǎn)M組較SR組受損股四頭肌乙酰膽堿酯酶活性、MEP數(shù)目和MEP平均截面積隨按摩周期的增加逐步增高；SDH深染Ⅰ型肌纖維百分含量、SDH酶和K+-Na+-ATPase酶活性都明顯增加(P<0.01)，并幾乎接近正常股四頭肌肌組織水平；免疫組織化學(xué)染色顯示SR組α-Actin、Desmin染色淺，肌纖維骨架結(jié)構(gòu)紋理紊亂，α-Ac

7、tin、Desmin表達(dá)明顯低于N組(P<0.05)；M組各時(shí)間點(diǎn)α-Actin、Desmin所顯示的細(xì)胞骨架紋理結(jié)構(gòu)逐步恢復(fù)，α-Actin、Desmin表達(dá)均較SR組增強(qiáng)(P<0.05)，且M14d組明顯高于M7d組(P<0.05)；Western blot檢測(cè)證實(shí)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果。
　　結(jié)論：
　　按摩可能通過(guò)促進(jìn)受損股四頭肌組織毛細(xì)血管的形成、微循環(huán)的重建，改善血供，增強(qiáng)有氧代謝相關(guān)的酶活性，改善肌細(xì)胞有氧代謝相