2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:糖尿病周圍血管病變的病理改變?yōu)閯用}粥樣硬化,患者患病率高、發(fā)病年齡早、病情進展快,常伴多器官同時受累較多。內(nèi)皮細胞受損是糖尿病血管病變的始動因子之一,內(nèi)皮細胞分泌多種細胞因子,通過復(fù)雜的機制調(diào)節(jié)管壁的通透性及血管張力,血管的形成和重塑亦受內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的細胞外基質(zhì)蛋白的影響。糖尿病下肢血管缺血性病變患者在應(yīng)用動脈介入治療后,取得明顯療效,但是,由于介入治療引起的內(nèi)膜損傷也成為術(shù)后再狹窄的主要原因之一,如何預(yù)防介入治療后再狹窄成為亟待

2、解決的問題。
  本研究旨在:1通過球囊擴張術(shù)制備兔后肢動脈內(nèi)膜損傷模型,損傷動脈內(nèi)膜局部行人臍血干細胞移植。2通過監(jiān)測移植前后血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、內(nèi)皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)水平的變化,觀察人臍血干細胞(HUCBSC)移植對內(nèi)皮功能的影響。3通過損傷動脈內(nèi)膜病理變化觀察人臍血干細胞移植對動脈內(nèi)膜的修復(fù)作用,探討臍血干細胞移植對介入治療后再狹窄的預(yù)防作用。
  方法:實驗對象新西蘭大白兔18只,由河北醫(yī)科大

3、學(xué)第四醫(yī)院實驗動物中心提供,為清潔級,雄性,體重2.1±0.5Kg。隨機分為三組,每組6只,正常對照組(A組),只行兔左側(cè)股動脈分離術(shù);球囊損傷組(B組),單純行左側(cè)股動脈球囊擴張、牽拉,造成動脈內(nèi)膜損傷;球囊損傷后人臍血干細胞移植組(C組),于球囊損傷左側(cè)股動脈后行人臍血干細胞移植,同時A組和B組注射等量的PBS緩沖液作為對照,術(shù)畢均予縫合傷口,青霉素鈉(160萬U/次,2次/日)肌肉注射抗感染,連用3d,肝素鈉注射液(200U/Kg

4、.d)連用3d。各組動物于術(shù)前及干預(yù)后1周、4周采集外周血,用ELISA法測定VEGF的水平、ET-1的水平,血漿NO采用硝酸還原酶法測定;術(shù)后4周所有動物處死前取左側(cè)股動脈,行HE染色觀察內(nèi)膜修復(fù)情況。
  1、人臍血干細胞(HUCBSC)的采集、分離、制備
  人臍血來源于足月分娩健康產(chǎn)婦,采集新鮮臍血(6h內(nèi)用完),先用PBS液等倍數(shù)稀釋后放置于離心管(50ml)中,按1:1配比加入至人淋巴細胞分離液上,4℃保存,8c

5、m離心半徑,每分鐘2000轉(zhuǎn),離心20分鐘后,臍血分成5層,單個核細胞在中間白膜層,此時用移液器在中間白膜層小心吸取含單個核細胞的混懸液,放入另一個離心管中,4℃,8cm離心半徑,每分鐘1000轉(zhuǎn),離心15分鐘,PBS液洗滌3次。最后用低糖DMEM培養(yǎng)液懸浮,細胞濃度計數(shù)為5×105/ml.人臍血干細胞混懸液采集、分離、制備成功。
  2、兔股動脈球囊損傷模型制備
  從兔耳緣靜脈注入3%戊巴比妥鈉2ml/kg麻醉,術(shù)中肝素

6、200u/kg抗凝,于左側(cè)腹股溝韌帶至膝關(guān)節(jié)上下縱行切開,分離左側(cè)股動脈,夾閉近端、遠端血管,于近心端進行股動脈穿刺,A組:僅行左側(cè)后肢股動脈分離術(shù);B組、C組行股動脈穿刺后把3.0-40mm球囊緩慢送入至股動脈,給12個大氣壓充盈球囊,保持3分鐘,間歇1分鐘后重復(fù)上述操作,共操作3次,同時牽拉球囊,以制成兔左后肢股動脈球囊損傷模型。
  3、球囊損傷后人臍血干細胞移植術(shù)
  B、C兩組球囊損傷兔左后肢股動脈模型制備成功后,

7、恢復(fù)股動脈血流3分鐘,夾閉A、B、C三組分離的股動脈遠端,A、B組于夾閉股動脈近端處注入0.5mlPBS緩沖液,C組在夾閉股動脈近端處注入已制備好的人臍血干細胞混懸液0.5ml。注射完畢后,三組分離的股動脈近端均用血管夾夾閉30分鐘,讓移植的干細胞充分歸巢,手術(shù)縫合傷口,使股動脈恢復(fù)血流。肝素(200U/kg.d),抗凝3天。
  4、移植前后血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、內(nèi)皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)水平的測定
  

8、A、B、C三組術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后4周均采外周血5ml,枸櫞酸鈉抗凝,分離血漿備用。VEGF、ET-1測定采用ELISA法,單位:μg/L。血漿一氧化氮(NO)測定采用硝酸還原酶法測定,單位:umol/L。
  5、損傷血管內(nèi)膜修復(fù)的觀察
  移植后4周,常規(guī)方法制備兔損傷血管光鏡組織切片,行蘇木素-伊紅(HE)染色,采集圖像,觀察損傷血管內(nèi)膜修復(fù)情況。
  應(yīng)用SPSS14.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計,計量資料以x±s

9、表示,組間、組內(nèi)比較采用方差分析(F檢驗),以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
  結(jié)果:1、實驗動物觀察 A、B、C三組動物術(shù)后傷口逐漸愈合,無糜爛潰瘍,活動能力正常,所有動物在處死取材時,局部均無壞疽,所有動物中途無因故退出。
  2、 VEGF水平測定結(jié)果術(shù)前,A、B、C三組VEGF水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);術(shù)后1周,C組VEGF水平升高,高于B組和A組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),B組VEGF水平

10、高于A組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);術(shù)后4周,C組VEGF水平仍高于B組和A組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),B組VEGF水平高于A組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。A組組內(nèi)VEGF水平術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后4周差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);B組組內(nèi)VEGF水平術(shù)后4周高于術(shù)前、術(shù)后1周,術(shù)后1周高于術(shù)前,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);C組組內(nèi)VEGF水平術(shù)后1周高于術(shù)前、術(shù)后4周,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)

11、,術(shù)后4周高于術(shù)前,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
  3、 ET-1和血漿NO水平的變化 A、B、C三組術(shù)前ET-1水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);術(shù)后1周,C組ET-1水平低于A、B兩組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),B組ET-1水平低于A組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);術(shù)后4周C組ET-1水平均低于于A、B兩組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),B組ET-1水平低于A組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

12、A組組內(nèi)ET-1水平術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后4周差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);B組組內(nèi)ET-1水平術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后4周兩兩比較均有差異(P<0.05);C組組內(nèi)ET-1水平術(shù)前與術(shù)后4周無差異,術(shù)后4周低于術(shù)后1周,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。A、B、C三組術(shù)前NO水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);術(shù)后1周,C組NO水平高于A、B兩組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),A、B兩組NO水平差異不顯著;術(shù)后4周,C組NO水平高

13、于A、B兩組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),A、B兩組NO水平差異不顯著。C組術(shù)后4周較術(shù)前、術(shù)后1周均有升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。A組組內(nèi)NO水平術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后4周差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);B組組內(nèi)NO水平術(shù)前高于術(shù)后1周、術(shù)后4周,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),術(shù)后1周NO水平高于術(shù)后4周,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);C組組內(nèi)NO水平術(shù)后4周較術(shù)前、術(shù)后1周均有升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0

14、.05),術(shù)前高于術(shù)后1周,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
  4、股動脈內(nèi)膜修復(fù)的觀察術(shù)后4周,C組動物股動脈有輕度內(nèi)膜中斷和增生,彈力膜輕度斷裂, B組動物股動脈內(nèi)膜連續(xù)性中斷,內(nèi)膜增生明顯,彈力膜斷裂明顯;A組動物股動脈內(nèi)膜完整,彈力膜連續(xù),無斷裂。
  結(jié)論:
  1、本實驗通過球囊擴張并阻斷血流建立兔左后肢股動脈缺血損傷模型。
  2、人臍血干細胞移植可能促進兔模型血清VEGF分泌,誘導(dǎo)血管形成,增

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