多元摻雜納米羥基磷灰石粉體體外細(xì)胞毒性的相關(guān)研究.pdf

1、背景：
　　羥基磷灰石具有與人體骨組織和牙齒礦物質(zhì)相似的化學(xué)組成和晶體結(jié)構(gòu)，而被用作硬組織植入材料。雖然羥基磷灰石有著諸多的優(yōu)點(diǎn)和良好的應(yīng)用前景，但是其同樣存在著生物學(xué)活性不足和不易降解等缺點(diǎn)，從而限制了其臨床應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)人體骨組織磷灰石中除了含有鈣和磷之外，還含有大量的微量元素。目前，通過水熱法可以合成多元素?fù)诫s的納米羥基磷灰石粉體。但多元素?fù)诫s是否會(huì)對(duì)納米羥基磷灰石粉體的毒性產(chǎn)生影響尚不明確。本研究將對(duì)這一問題展開研究。

2、r>　　目的：
　　研究多元摻雜對(duì)納米羥基磷灰石粉體體外細(xì)胞毒性的影響及相關(guān)機(jī)制;研究多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液體外細(xì)胞毒性及相關(guān)機(jī)制;初步探索多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對(duì)牙髓細(xì)胞的影響為繼續(xù)探索臨床應(yīng)用以及深入研究硬組織植入材料多元摻雜納米羥基磷灰石涂層的制備和生物學(xué)效應(yīng)提供一定的理論依據(jù)。
　　方法：
　　第一部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體體外細(xì)胞毒性及相關(guān)機(jī)制。
　　1.以CCK-8比色法研究多元摻

3、雜納米羥基磷灰石粉體對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響;
　　2.以AnnexinV-PI雙染法經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)、以Hochest33342-PI雙染法經(jīng)熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡;
　　3.以ROS熒光探針標(biāo)記經(jīng)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)活性氧;
　　4.以JC-1熒光探針標(biāo)記經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位變化;
　　5.以Western-Bolt法檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　第二部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液體外

4、細(xì)胞毒性及相關(guān)機(jī)制。
　　1.以完全培養(yǎng)液制備多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液;
　　2.以CCK-8比色法研究多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響;
　　3.以Annexin V-PI雙染法經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡;
　　4.以Western-Bolt法檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　第三部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對(duì)牙髓細(xì)胞的影響。
　　1.人牙髓原代細(xì)胞的培養(yǎng);
　　2.

5、以CCK-8比色法研究多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果：
　　第一部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體體外細(xì)胞毒性及相關(guān)機(jī)制。
　　多元摻雜納米羥基磷灰石粉體與非摻雜粉體均可以抑制L929細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并誘導(dǎo)L929細(xì)胞產(chǎn)生ROS和線粒體膜電位降低，同時(shí)促進(jìn)p53蛋白表達(dá)，刺激Caspase3蛋白活化。另外，通過細(xì)胞凋亡檢測(cè)多元摻雜納米羥基磷灰石粉體具有較高的凋亡率，且ROS水平和線粒

6、體膜電位降低的比例也較高。通過細(xì)胞增殖檢測(cè)結(jié)果可知雖然多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對(duì)于L929細(xì)胞增殖的抑制作用更強(qiáng)，但兩者之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.9716)。
　　第二部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體浸提液體外細(xì)胞毒性及相關(guān)機(jī)制。
　　多元摻雜納米羥基磷灰石粉體與非摻雜粉體浸提液均可以抑制L929細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡，同時(shí)促進(jìn)p53蛋白表達(dá)，刺激Caspase3蛋白活化;通過細(xì)胞增殖檢測(cè)結(jié)果可知，兩者之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義(p=0.9728)。
　　第三部分 多元摻雜納米羥基磷灰石粉體對(duì)牙髓細(xì)胞的影響。
　　多元摻雜納米羥基磷灰石粉體與非摻雜粉體與目前臨床常用的兩種氫氧化鈣蓋髓材料（Calcimol LC、氫氧化鈣根管消毒材料）對(duì)人牙髓細(xì)胞的增殖均無明顯影響，各處理組與對(duì)照組OD值相比差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;且兩種納米羥基磷灰石材料之間的差異同樣沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.9411)。
　　結(jié)論：
　　1.多元摻雜納米羥基磷灰石粉體