不同鈣通道在胞外鈣引起的成骨細胞增殖過程中的作用.pdf

1、成骨細胞起源于多功能的骨髓間質的基質細胞，是參與骨重建的重要功能細胞之一，能夠增殖分化，分泌骨質，形成骨細胞。已有多篇文獻提出成骨細胞外鈣離子濃度([Ca2+]o)的升高可導致骨形成。([Ca2+]o)的內流會刺激細胞內鈣離子濃度([Ca2+]i)產生相應的變化，成骨細胞增殖與([Ca2+]i)的變化有重要聯(lián)系。鈣離子的內流是與膜上的通道蛋白密切相關，本文通過MTT比色法檢測不同鈣通道阻斷劑對成骨細胞的增殖的影響，通過單細胞鈣離子熒光成

2、像技術檢測在相同([Ca2+]o)刺激下不同鈣通道阻斷劑對成骨細胞([Ca2+]i)變化的影響，進而探討參與此過程的鈣離子通道以及相應機制。
　　 我們通過MTT比色法證明了成骨細胞在含有10mM/L Ca2+的培養(yǎng)基中細胞活力增加比率最高，同對照組相比，平均增殖率在20％。在加入鈣通道阻斷劑MTT實驗中，同樣加入含有10mM/L Ca2+的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含有100μm/L TMB-8和100μM/L U73122的成骨細胞樣本

3、同對照組相比，活力分別降低了14%和17.7%；我們在100nM/L、1μM/L、10μM/L濃度下重復Nifedipine和Verapamil的MTT增殖實驗，同對照組相比，這些濃度下的Nifedipine和Verapamil對成骨細胞的增殖并沒有影響，但值得注意的是100μM/L濃度下的Verapamil可以抑制SOC活性，從而抑制成骨細胞增殖，測得活力降低16.2%。
　　 單細胞熒光測鈣實驗結果表明：1、用10mM/L的

4、[Ca2+]o刺激成骨細胞，能夠引起[Ca2+]i的升高，且在加入刺激初始階段，[Ca2+]i會有一個明顯的快速上升階段，之后進入持續(xù)升高階段；2、用100μM/L TMB-8和100μM/L U73122預處理過的成骨細胞，在受到10mM/L的[Ca2+]o刺激后，沒有明顯的快速上升階段，而之后的緩慢的持續(xù)升高階段同沒有TMB-8預處理的細胞現(xiàn)象相同；3、經100nM/L、1μM/L、10μM/L Nifedipine預處理過的成骨細

5、胞，單細胞測鈣曲線與對照組曲線無明顯差異；4、經100nM/L、1μM/L、10μM/L Verapamil預處理過的成骨細胞，測鈣曲線與對照組曲線五明顯差異，但經100μM/L Verapamil預處理的成骨細胞，加入[Ca2+]o刺激后快速上升階段明顯被抑制，這與相應的MTT實驗結果相吻合。
　　 本文結論：1、細胞外高濃度的鈣可以促進成骨細胞增殖；2、SOC機制在細胞外鈣引起成骨細胞增殖的過程中起作用；3、電壓門控的鈣離子