G-CSF誘導小鼠造血干細胞動員過程中成骨細胞及破骨細胞的變化.pdf

1、目的:造血干細胞(HSC)目前被廣泛用于移植治療惡性血液系統(tǒng)疾病，采集足夠量的造血干細胞是移植治療成功的關鍵前提，近年研究明確，骨髓微環(huán)境中存在著兩種以上的骨髓龕，其中骨內(nèi)膜龕對維持造血干細胞的穩(wěn)定靜止起著重要作用，而成骨細胞是骨內(nèi)膜龕的重要組成部分，大量實驗表明，G-CSF動員后成骨細胞數(shù)量減少，功能減低，破骨細胞作為與成骨細胞相反作用的細胞，在動員過程中發(fā)生什么變化，值得我們?nèi)パ芯?，本研究以小鼠為研究對象，觀察G-CSF動員對小鼠成

2、骨、破骨細胞的影響，以及通過PTH誘導激活破骨細胞，觀察對造血干細胞動員的影響。
　　方法:利用流式細胞計數(shù)檢測動員O、3、5天小鼠外周血干細胞比例，觀察G-CSF誘導動員的情況，通過實時定量-多聚酶鏈式反應(RQ-PCR)檢測動員前后骨髓細胞骨鈣素(OCN)、基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的mRNA表達，免疫組織化學檢測骨髓OCN（成骨細胞特異性表達）陽性細胞的數(shù)量來比較動員前后成骨細胞的數(shù)量和

3、功能上的變化，ELISA法檢測小鼠周血TRACP-5b的濃度反應破骨細胞活性，抗酒石酸磷酸酶（TRAP）染色檢測小鼠股骨中破骨細胞數(shù)量，評價G-CSF動員對成骨、破骨細胞的影響。大劑量PTH(甲狀旁腺素)激活破骨細胞，觀察激活破骨細胞后能否產(chǎn)生HSC動員效應。
　　結(jié)果:
　　1.骨髓SDF-1和OCN表達減少，提示成骨細胞功能降低;MMP9表達增高，提示中性粒細胞釋放MMP9，骨髓基質(zhì)發(fā)生蛋白水解。
　　2.顯微鏡下

4、觀察動員后骨髓成骨細胞數(shù)量減少，形態(tài)由原來卵圓形變?yōu)樗笮沃帘馄较А?br>　　3.小鼠外周血TRACP-5b增多，0天（4.43±0.52IU/L）、5天（10.49±1.75mIU/mL），提示破骨細胞活性增高;TRAP染色提示注射G-CSF后破骨細胞數(shù)量增多。
　　4.大劑量PTH激活破骨細胞能夠產(chǎn)生HSC動員效應。
　　結(jié)論:G-CSF動員后成骨細胞數(shù)量及活性降低，導致SDF-1趨化能力減弱，破壞造血干細胞靜止狀態(tài)引