Hedgehog在牽張力促進成骨細胞增殖中的作用研究.pdf

1、研究目的：Hedgehog(Hh)家族中的Ihh和Shh是骨生長發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子。本研究的目的是觀察牽張力下Hh的表達及其對成骨細胞增殖的影響，從而明確機械應(yīng)力對成骨細胞調(diào)控的機制。 材料與方法：體外分離和培養(yǎng)新生大鼠顱頂骨成骨細胞,應(yīng)用Flexcell 4000TM加力系統(tǒng)施加3％和6％的兩種張應(yīng)變。用Hedgehog N端重組蛋白（N-Shh）、Hedgehog 通道抑制劑Cyclopamine(cy)和機械通道抑制劑三氯

2、化釓（GdCl3）對成骨細胞進行干預(yù)。分別采用細胞計數(shù)、MTT比色法和流式細胞儀檢測成骨細胞的增殖；利用堿性磷酸酶(ALP)定性和定量分析和茜素紅染色（ARS）檢測成骨細胞分化及基質(zhì)鈣化；定量PCR檢測Hedgehog 通路相關(guān)基因Ihh、Shh、Ptch、Smo和β-Catenin的表達。采用SAS8.0軟件包對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：在成骨細胞體外培養(yǎng)過程中，Shh的表達逐漸減弱，而Ihh的表達逐漸增強。外源性N-Shh蛋

3、白使成骨細胞數(shù)目增加21.2％(P＜0.05)，S期細胞比例增加37.4％(P<0.05)，并且促進ALP的活性以及Ptch和Smo的表達；cy則抑制成骨細胞的增殖和分化。牽張力促進了成骨細胞的增殖，以6％張應(yīng)變更顯著；加力4h、12h和24h后，Shh基因表達沒有明顯變化，而Ihh的表達分別增加了20％、60％和50％(P＜0.05)，其下游基因Ptch和Smo的表達變化與Ihh類似，β-Catenin 在4h和12h后表達明顯增加，