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文檔簡(jiǎn)介
1、鎘是廣泛存在于環(huán)境中的重金屬污染物,由于其累積毒性可對(duì)機(jī)體造成極大的損害。它可對(duì)機(jī)體的多個(gè)器官造成損害,其中腎臟和骨骼是鎘主要的毒害器官。鎘骨毒性相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道很多,但鎘暴露對(duì)成骨細(xì)胞自噬和凋亡方面的報(bào)道較少。因此,本研究通過(guò)建立體外大鼠原代成骨細(xì)胞鎘中毒模型,探討了鎘暴露對(duì)成骨細(xì)胞自噬和凋亡的影響以及自噬對(duì)凋亡的作用。以不同濃度的醋酸鎘(0、1、2、5μmol/L)處理原代大鼠成骨細(xì)胞12h或2μmol/L醋酸鎘處理成骨細(xì)胞0、1、2
2、、3、6、12h,免疫印跡檢測(cè)Bax、Bcl-2、Cleaved-PARP的蛋白表達(dá),hoechst33258染色觀察細(xì)胞核的變化來(lái)研究鎘能否誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;不同濃度的醋酸鎘(0、1、2、5μmol/L)處理原代大鼠成骨細(xì)胞1h或2μmol/L醋酸鎘處理成骨細(xì)胞0、1、2、3、6、12h,免疫印跡檢測(cè)LC3-Ⅱ、Beclin-1的表達(dá)量,MDC染色法、AO染色法、免疫熒光觀察LC3的聚點(diǎn)現(xiàn)象來(lái)探究鎘暴露細(xì)胞的自噬水平;鎘、雷帕霉素(RAP
3、)單獨(dú)或共處理,氯喹(CQ)、鎘單獨(dú)或共處理及RNA干擾,免疫印跡測(cè)定LC3-Ⅱ的表達(dá)量、流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定凋亡率來(lái)研究自噬對(duì)凋亡的作用。
結(jié)果表明:①0、1、2、5μmol/L醋酸鎘處理大鼠成骨細(xì)胞12h或2μmol/L醋酸鎘處理細(xì)胞1、2、3、6、12h,與對(duì)照組相比,染鎘組Bax/Bcl-2比值顯著或極顯著升高(P<0.05或P<0.01),Cleaved-PARP蛋白表達(dá)量極顯著上調(diào)(P<0.01);染鎘能引起成骨細(xì)胞核形
4、態(tài)的改變,出現(xiàn)核皺縮、染色質(zhì)凝集等典型的凋亡特征,且隨著染鎘濃度的增強(qiáng),發(fā)生核形態(tài)改變的細(xì)胞數(shù)增多。②與對(duì)照組相比,2μmol/L鎘處理成骨細(xì)胞1h后,MDC熒光強(qiáng)度增強(qiáng),出現(xiàn)明亮的點(diǎn)狀結(jié)構(gòu);染鎘組細(xì)胞出現(xiàn)明顯的LC3聚點(diǎn)現(xiàn)象;0、1、2、5μmol/L醋酸鎘處理大鼠成骨細(xì)胞1h后,與對(duì)照組相比,1、2μmol/L染鎘組AO染色紅色熒光強(qiáng)度顯著或極顯著增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01),而5μmol/L染鎘組紅色熒光強(qiáng)度極顯著下降(P<
5、0.01);不同濃度的醋酸鎘處理成骨細(xì)胞1h后,隨著染鎘濃度的增加,LC3-Ⅱ的表達(dá)量先增加、后降低,且與對(duì)照組相比,1、2μmol/L染鎘組LC3-Ⅱ表達(dá)量顯著升高;Beclin-1蛋白表達(dá)的變化與LC3-Ⅱ基本一致。2μmol/L醋酸鎘處理成骨細(xì)胞不同時(shí)間后,隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng),LC3-Ⅱ表達(dá)量先增加、后降低,且與對(duì)照組相比,染毒3h后(包括3h)LC3-Ⅱ表達(dá)量顯著下調(diào)(p<0.01);Beclin-1蛋白表達(dá)的變化與LC3-Ⅱ相
6、似。③與單獨(dú)染鎘組相比,RAP與鎘聯(lián)合處理組及CQ與鎘聯(lián)合處理組,LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)量均顯著升高;RAP與鎘聯(lián)合處理組細(xì)胞凋亡率極顯著降低(P<0.01),CQ與鎘聯(lián)合處理組細(xì)胞凋亡率極顯著升高(p<0.01);Beclin1 RNA干擾后,與單獨(dú)染鎘組相比,Beclin1 RNA干擾后染鎘組的Beclin1、LC3-Ⅱ表達(dá)量均極顯著降低(p<0.01),細(xì)胞凋亡率也極顯著升高(p<0.01)。
表明鎘能誘導(dǎo)大鼠成骨細(xì)胞凋亡,
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