p38MAPK在小鼠成骨細胞增殖、分化和凋亡中的作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、骨質(zhì)疏松癥及相關(guān)的骨折是全球性中老年婦女死亡率和致殘率升高的重要原因,隨著世界人口的老齡化,骨質(zhì)疏松癥將成為前所未有的公共衛(wèi)生問題。 雌激素撤退與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥有(PMOP)密切關(guān)系,但是雌激素替代治療在防治骨質(zhì)疏松癥的同時,明顯增加了心臟疾患、中風及乳腺癌的發(fā)病率。應運而生的雷洛昔芬(RLX)等選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM),與雌激素相比,對心臟、乳腺的副作用明顯降低。但是,近年的臨床病例研究提示雷洛昔芬可能與惡性混合性

2、苗勒氏管腫瘤及子宮出血的發(fā)生有關(guān)。目前對于雌激素和雷洛昔芬治療骨質(zhì)疏松癥的確切機制尚不明確。因此深入探討SERM類藥物的作用機制,尋找新的組織選擇性更高的藥物成為亟待解決的問題。本研究以雷洛昔芬和17β-雌二醇(17β-E<,2>)為藥物刺激因子,觀察p38MAPK信號通路在成骨細胞(OBs)增殖、分化和凋亡中的作用,旨在研究雷洛昔芬和17β-雌二醇是否在p38MAPK信號通路中存在不同,為新的骨質(zhì)疏松癥防治藥物的研發(fā)提供理論基礎。

3、 第一部分 p38MAPK在小鼠成骨細胞增殖和分化中的作用 目的:探討p38MAPK信號轉(zhuǎn)導通路在成骨細胞增殖和分化過程中的作用。 方法:取第一繼代BALB/c小鼠頭蓋骨來源的成骨細胞,藥物刺激組分別加入不同濃度17 β-雌二醇或雷洛昔芬;含阻斷劑組預先添加不同濃度的SB202190阻斷p38MAPK信號轉(zhuǎn)導通路后,再加17 β-雌二醇或雷洛昔芬;另設對照組。72小時后用MTT法和細胞周期測定法檢測成骨細胞的增殖能力

4、;PNPP法和RT-PCR法檢測成骨細胞內(nèi)堿性磷酸酶(ALP)的表達水平。 結(jié)論:17 β-雌二醇和雷洛昔芬能夠通過p38MAPK信號通路,促進小鼠成骨細胞的增殖和分化。 第二部分 p38MAPK在小鼠成骨細胞凋亡中的作用 目的:探討p38MAPK信號通路對小鼠成骨細胞凋亡的影響。 方法:酶消化法原代培養(yǎng)小鼠成骨細胞,取第一繼代成骨細胞并分組加藥:含藥物組加入17 β-雌二醇(10<'-8>M)或雷洛昔芬

5、(10<'-7>M);含阻斷劑組預先添加SB202190(終濃度10 μM),阻斷p38MAPK信號轉(zhuǎn)導通路后,再加入17 β-雌二醇(10<'-8>M)或雷洛昔芬(10<'-7>M);另設對照組。無血清培養(yǎng)法誘導成骨細胞早期凋亡。Annexin V-FITC/PI雙標記流式細胞儀分析細胞早期凋亡。 結(jié)論:17 β-雌二醇和雷洛昔芬能夠抑制成骨細胞的無血清凋亡;p38MAPK信號通路對成骨細胞的凋亡無明顯影響。 第三部分

6、p38MAPK對小鼠成骨細胞內(nèi)Col I α<,1>、TSP2、OPG和RANKL表達的影響 目的:探討p38MAPK信號通路對成骨細胞內(nèi)Col I α<,1>、TSP2、OPG和RANKI表達的影響。 方法:取第一繼代BALB/c小鼠頭蓋骨來源的成骨細胞,藥物刺激組分別加入17 β-雌二醇(10<'-8>M)或雷洛昔芬(10<'-7>M);含阻斷劑組預先添加SB202190(終濃度20 u M)阻斷p38MAPK信號轉(zhuǎn)

7、導通路后,再加17 β-雌二醇或雷洛昔芬;另設對照組。72小時后收集細胞,提取細胞內(nèi)總RNA,RT-PCR法檢測細胞內(nèi)Ⅰ型膠原α<,1>鏈(ColIα<,1>)、血小板反應蛋白2(TsP2)、骨保護素(OPG)和核因子K B受體(RANKL)的表達水平。 結(jié)論:17 β-雌二醇或雷洛昔芬能夠促進成骨細胞內(nèi)TSP2、OPG和RANKL的表達,對OPG/RANKL無明顯影響;p38MAPK信號轉(zhuǎn)導通路在Col α<,1>、TSP2、

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