α--烯醇化酶在肝癌組織中的表達及臨床意義.pdf

1、原發(fā)性肝癌是目前我國常見惡性腫瘤的第四位及腫瘤致死病因的第三位，在全世界惡性腫瘤發(fā)病率中占第六位，已經(jīng)成為發(fā)展中國家經(jīng)濟負擔(dān)加重的主要原因之一。原發(fā)性肝癌主要包括肝細胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)、肝內(nèi)膽管癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma，ICC)和HCC-ICC混合型三種不同病理類型，其中肝細胞癌在所有肝臟腫瘤中占到85％-90％以上，因此文中肝癌主要指肝細胞肝癌。肝

2、炎病毒、長期酗酒、非酒精脂肪性肝炎、黃曲霉毒素污染食物等是HCC發(fā)生的高危因素，其中乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染是導(dǎo)致肝癌發(fā)生比較明確的致病因素。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展進步，肝細胞肝癌的治療手段也取得了很大的進展，手術(shù)切除、肝移植、射頻消融術(shù)為延長肝癌患者生存時間提供了機會。但是，大多數(shù)肝癌患者被確診時已進展至晚期肝癌階段而喪失手術(shù)治療的時機。而且，肝癌早期發(fā)生的肝內(nèi)、外轉(zhuǎn)移也是其預(yù)后差、復(fù)發(fā)率高的主要原因。然而，目前

3、研究還沒有發(fā)現(xiàn)有效的檢測標(biāo)記物可以預(yù)示肝癌發(fā)生、指導(dǎo)肝癌治療。甲胎蛋白(AFP)是目前應(yīng)用最廣泛的肝癌的腫瘤標(biāo)志物，多用于術(shù)后監(jiān)測和療效評估，但其敏感性和特異性都不理想。因此，尋找肝癌新的分子標(biāo)志物，提高肝癌早期確診率，以及尋找肝癌治療的新靶點顯得尤為重要。
　　隨著人們對癌癥基因分子水平研究的不斷深入，越來越多與肝癌分期、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等惡性表型有關(guān)的基因、蛋白和信號通路被發(fā)現(xiàn)，且它們在HCC的形成和進展過程中發(fā)揮了極其重要的功能。

4、癌細胞的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)是一個復(fù)雜的過程，細胞內(nèi)在因素和外在微環(huán)境都有可能影響肝癌細胞轉(zhuǎn)移的發(fā)生。因此，通過對肝癌相關(guān)分子機制的深入研究，探索HCC復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的有效的治療靶點，可以極大地改善肝癌患者的整體預(yù)后。雖然關(guān)于肝癌重要的研究主要集中在癌基因和抑癌基因上，但最近強調(diào)了腫瘤細胞代謝的重要性。腫瘤細胞代謝被稱為Warburg效應(yīng)，癌細胞通過這種被稱為“有氧糖酵解”的過程將其葡萄糖代謝主要轉(zhuǎn)變?yōu)樘墙徒狻Ｑ芯孔C實葡萄糖攝入增加和有氧糖酵解是腫瘤

5、代謝的典型特征，而針對糖酵解通路的關(guān)鍵酶分析為靶向治療提供了研究方向。α-烯醇化酶(α-enolase，ENO1)是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，大量研究已經(jīng)證實在胃癌、腎細胞癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種腫瘤中ENO1高表達，并且在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。有研究表明ENO1在肝癌組織中也呈高表達，具有致癌基因的作用，但是由于研究中所用樣本數(shù)量有限，因此需要進一步證實其研究結(jié)果。本研究結(jié)合生物信息學(xué)知識，利用課題組自己搭建的在線分析數(shù)據(jù)庫CAAT

6、(Cancer Atlas Analysis Tools)對泛腫瘤組織樣本及TCGA、GEO里的肝癌mRNA表達譜數(shù)據(jù)進行分析，并且利用組織芯片免疫組化染色技術(shù)進行聯(lián)合分析，從mRNA和蛋白水平驗證ENO1在肝癌和癌旁組織中的表達差異，并分析其與肝癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系。
　　目的：
　　本課題擬結(jié)合生物信息學(xué)技術(shù)及網(wǎng)絡(luò)公共數(shù)據(jù)平臺分析ENO1在泛腫瘤和肝癌中的表達情況及與肝癌患者生存預(yù)后的關(guān)系，并分析其臨床意義。
　　

7、方法：
　　1.利用CAAT(Cancer Atlas Analysis Tools)在線分析數(shù)據(jù)庫分析泛腫瘤基因芯片中ENO1表達情況;
　　2.利用TCGA、GEO中基因芯片表達譜數(shù)據(jù)分析ENO1mRNA在肝癌中表達情況，并分析ENO1表達與臨床病理特征及生存預(yù)后的關(guān)系;
　　3.利用組織芯片免疫組化染色驗證肝癌中ENO1蛋白的表達水平及與生存預(yù)后的關(guān)系;
　　4.利用Graph Pad Prism5.0和S

8、PSS21.0軟件進行統(tǒng)計分析，所有數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。采用Kaplan-Meier生存曲線分析基因表達與預(yù)后的關(guān)系。兩組數(shù)據(jù)間的比較方法為雙側(cè)Student's t-test或Mann-Whitney's檢驗。以α=0.05作為檢驗水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1.ENO1在多腫瘤中表達有差異，肝癌中ENO1表達升高。
　　2.肝癌組織中ENO1mRNA的表達水平較癌旁組織中升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。單因素分析提示ENO

9、1的表達在不同TNM分期(P=0.023)、病理分級(P=0.008)的患者中有差異，而與種族(P=0.698)、年齡(P=2.258)、性別(P=0.453)、組織學(xué)類型(P=0.514)無明顯相關(guān)。COX多因素分析結(jié)果提示ENO1的表達水平（HR1.916，P=0.002）及TNM分期（HR2.462，P=0.000）是肝癌預(yù)后的獨立危險因素。
　　3.肝癌組織中ENO1蛋白較癌旁組織升高（Z=-2.457P=0.014），T

10、NM分期Ⅰ-Ⅱ期肝癌患者的ENO1表達水平要比Ⅲ-Ⅳ期患者的低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-2.042P=0.041）。Kaplan-Meier分析結(jié)果提示ENO1高表達的肝癌患者生存時間較ENO1低表達的患者短（HR=1.837，P=0.0435）。
　　結(jié)論：
　　1.ENO1在多腫瘤中表達有差異，肝癌中ENO1表達升高。
　　2.ENO1的高表達與肝癌患者的惡性臨床表型、更短的總生存期有關(guān)，具有作為肝癌早期診斷和靶向