奈比洛爾對腎性高血壓大鼠腎臟的保護作用及其與ADMA的關系.pdf

1、目的：
　　探討奈比洛爾對腎性高血壓大鼠腎臟的保護作用及其與非對稱性二甲基精氨酸(ADMA)的關系，為腎性高血壓的治療提供新思路。
　　方法：
　　選取體重150g雄性wistar大鼠，用內徑0.2mm銀夾夾閉左腎動脈，制備兩腎一夾(2K1C)腎性高血壓大鼠模型。術后4周用尾袖套法進行無創(chuàng)血壓測量，若收縮壓(SBP)大于160mmHg認為模型成功。同等體重健康大鼠僅分離左腎動脈，但是不夾閉腎動脈，作為偽手術對照組(i.

2、g蒸餾水)。2K1C大鼠隨機分成4組(n=6)：①2K1C腎性高血壓模型組(i.g蒸餾水)；②2K1C+奈比洛爾組(i.g10mg/day)；③2K1C+阿替洛爾組(i.g80mg/day)；④2K1C+卡托普利組(i.g20mg/day)，給藥8周。術前和術后不同時間段測量SBP并收集24小時尿液，用以檢測尿液中N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿肌酐(Ucr)、β2-微球蛋白(β2-MG)、微量白蛋白（mALB）和尿蛋白排泄量并計

3、算內生肌酐清除率(Ccr)。實驗結束時，大鼠麻醉后經(jīng)腹主動脈采血，用以檢測血漿一氧化氮(NO)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血漿腎素活力(PRA)、血管緊張素II(AngII)和非對稱性二甲基精氨酸(ADMA)濃度；并快速分離左右腎臟，用于觀察腎臟結構以及western blotting實驗；HE染色觀察腎臟結構；PAS染色觀察腎小球系膜增生；Masson及α-SMA免疫熒光觀察腎臟纖維化；KIM-1、nephrin免疫熒光觀察

4、腎小管和足細胞的損傷；透射電鏡觀察腎小球濾過屏障完整性，足細胞形態(tài)及基底膜厚度；蛋白印跡法測iNOS，eNOS，nNOS， DDAH1和2，PRMT1蛋白的表達。
　　結果：
　　與偽手術組比較，2K1C模型組腎動脈狹窄術后1周SBP開始升高，在第4周達到高值,并穩(wěn)定持續(xù)至術后12周，高達183.22±2.64mmHg。奈比洛爾、阿替洛爾和卡托普利均可逐漸降低2K1C大鼠SBP。2K1C大鼠的尿液體積和飲水量在術后1周急劇升

5、高，2周達到峰值，尿肌酐在術后4周內明顯低于偽手術組(P<0.05)，這種差異逐漸縮小,到實驗結束時,此三項改變在兩組之間無顯著性差異。與偽手術組比較，2K1C組尿蛋白排泄量在術后持續(xù)穩(wěn)定升高至術后12周，奈比洛爾和卡托普利均可降低2K1C大鼠尿蛋白，奈比洛爾效果較卡托普利顯著(P<0.05)。2K1C組大鼠血漿、左腎組織中AngII和PRA與偽手術組比較有上升趨勢但無統(tǒng)計學差異，但右腎組織中的AngII的含量明顯高于偽手術組，三藥都能

6、降低右腎AngII水平。HE染色觀察到2K1C組大鼠腎小球代償性肥大，PAS染色和 Masson染色及α-SMA熒光染色顯示腎小球系膜增生、腎小球和間質纖維化程度明顯增加；透射電鏡提示2K1C大鼠腎小球濾過屏障基底膜厚度明顯高于偽手術組，足細胞足突廣泛融合，nephrin免疫熒光顯示足細胞nephrin表達減少，上述改變尤以右側腎臟顯著。除阿替洛爾外，奈比洛爾和卡托普利均可不同程度改善2K1C大鼠上述改變，尤以奈比洛爾顯著(P<0.05

7、)。2K1C組大鼠尿液β2-MG/Ucr，mALB/Ucr，NAG的濃度和腎小管KIM-1表達明顯增加，給予奈比洛爾能夠有效降低β2-MG/Ucr，mALB/Ucr，NAG濃度和KIM-1的表達。并且奈比洛爾能夠降低Scr和BUN的水平，提高Ccr(P<0.05)。雖然2K1C與偽手術組血漿NO無明顯差異，但2K1C組大鼠左腎nNOS和左右兩腎eNOS表達明顯低于偽手術組，左腎iNOS表達則明顯高于偽手術組，奈比洛爾能夠增加2K1C大鼠

8、血漿NO水平，上調右腎nNOS和eNOS表達，下調左腎iNOS的表達。另一方面，2K1C組血漿ADMA增高，雖然兩側腎臟DDAH1表達無顯著性差異，但PRMT1表達顯著增加，且左腎DDAH2表達顯著降低(P<0.05)。奈比洛爾，阿替洛爾，卡托普利雖然不同程度影響PRMT1，DDAH1，2表達，但僅奈比洛爾降低2K1C大鼠血漿ADMA水平。
　　結論：
　　奈比洛爾可顯著改善2K1C腎性高血壓大鼠腎功能損傷和結構變化，此作用