復腎功方對CRF大鼠腎臟保護作用的研究.pdf

1、背景：慢性腎功能衰竭(Chronic Renal Failure，CRF)是由先天或后天原因?qū)е碌穆赃M行性腎實質(zhì)損害，致使腎臟功能嚴重受損的臨床綜合征，主要表現(xiàn)為氮質(zhì)血癥、代謝產(chǎn)物潴留、水電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡失調(diào)和全身各系統(tǒng)癥狀，為腎臟疾病持續(xù)發(fā)展的最終歸宿。據(jù)有關(guān)統(tǒng)計，全球終末期腎功能衰竭靠透析維持生命者多達360萬人，而中國各種腎臟病人有4000余萬人，每年新發(fā)生的慢性腎功能衰竭患者則有10-30萬人左右。有人預測，未來10年世界

2、慢性腎功能衰竭患者治療費用至少需要1.1萬億美元，如此龐大的費用已使政府感到棘手。中醫(yī)藥防治慢性腎功能衰竭療效確切，而復腎功方是首屆國醫(yī)大師、著名中醫(yī)學家、全國名老中醫(yī)郭子光教授經(jīng)過60余年來臨床驗證總結(jié)出來的、治療慢性腎功能衰竭確有卓著療效的經(jīng)驗方。因此，研究復腎功方對CRF大鼠腎臟的保護作用，可為中醫(yī)藥治療CRF尋找新的治療靶點提供實驗依據(jù)，而本課題研究對于深入挖掘國醫(yī)大師臨床經(jīng)驗具有十分重要的臨床實用價值、社會經(jīng)濟價值及科學研究價

3、值。
　　目的：為了研究復腎功方對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟的保護作用，本課題檢測了慢性腎功能衰竭大鼠腎組織α-SMA、E-cadherin及Nephrin等蛋白的表達，分別從抗腎纖維化、保護腎小管及足細胞等角度，探討復腎功方保護慢性腎功能衰竭大鼠腎臟的作用機制，以期為開發(fā)一個安全有效的治療CRF的中成藥提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：取雄性SD大鼠55只，適應性飼養(yǎng)1周后，隨機分為5組：正常組，模型組，復腎功方低、中、高劑量組，每組

4、11只。正常組常規(guī)飼養(yǎng)，其余各組大鼠食用含0.5％腺嘌呤飼料，每只大鼠按1天食入20g料塊計算，連續(xù)21d。造模21天后，隨機抽取各組大鼠1只，摘取眼球采血，分離血清，檢測Scr和BUN等指標以驗證造模是否成功。造模成功后，所有大鼠均停用含0.5％腺嘌呤的飼料，改用常規(guī)飼料。從造模成功后第1天起，正常組和模型組給予NS20mL?kg-1體重灌胃，復腎功方低、中、高劑量組分別以4、8、16 g生藥?kg-1體重灌胃復腎功方煎劑，每日1次，

5、連續(xù)30 d。
　　治療30d后，末次給藥后禁食不禁水12 h，按20%烏拉坦5 mL?kg-1進行麻醉，摘取眼球采血3-5 ml，靜置1-2 h，4000 r?min-1離心10 min，分離血清，取上清液，低溫4℃保存待檢測用。頸椎脫臼處死大鼠，打開腹腔取出腎臟，并做檢測前組織的相關(guān)處理。HE染色和Masson染色檢測腎組織形態(tài)學改變和腎間質(zhì)纖維化程度，免疫組化及 western blotting檢測α-SMA及E-cadhe

6、rin蛋白的表達，免疫熒光及RT-PCR檢測Nephrin mRNA的表達。
　　結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠腎組織α-SMA表達明顯上調(diào)（P＜0.05），E-cadherin及Nephrin表達明顯下調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，復腎功方各劑量組腎組織α-SMA表達明顯下調(diào)（P＜0.05）， E-cadherin及Nephrin蛋白表達則顯著上調(diào)（P＜0.05）。光鏡下正常組大鼠腎小管和腎小球結(jié)構(gòu)正常，未見明顯組織學改變；

7、模型組大鼠腎小球變形萎縮，球囊閉塞，腎小管萎縮，管腔明顯擴大，間質(zhì)纖維化明顯，間質(zhì)炎性細胞彌漫浸潤。經(jīng)復腎功方治療后，復腎功方低劑量組大鼠腎小球、腎小管萎縮及間質(zhì)纖維化有所減輕，間質(zhì)炎性細胞彌漫浸潤；復腎功方中劑量組大鼠腎小球、腎小管萎縮及間質(zhì)纖維化明顯減輕，間質(zhì)炎性細胞浸潤減輕；復腎功方高劑量組大鼠腎臟病理改變顯著減輕，間質(zhì)炎細胞浸潤明顯減輕。
　　結(jié)論：復腎功方對CRF大鼠腎臟的保護作用，可能通過復腎功方抗腎纖維化、保護腎小管