24小時內(nèi)MDMA對大鼠腦組織氧化應激、凋亡相關蛋白及內(nèi)質網(wǎng)Ca2+通道的影響.pdf

1、【目的】
　　當前,MDMA在全世界泛濫流行,是法醫(yī)學和毒理學研究的熱點之一。目前有關MDMA的研究主要局限于24h以上的毒性作用機制,而人們對24h以內(nèi)的MDMA如何影響人體知之甚少。由于服用MDMA最短可在幾分鐘內(nèi)起效,對人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生影響,因此對24h內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)MDMA的作用機制的研究非常必要。本課題利用多種方法和技術,從氧化應激、細胞凋亡和內(nèi)質網(wǎng)Ca2+通道等方面對MDMA染毒大鼠24h內(nèi)腦組織進行研究,希望能進一步

2、闡述MDMA中毒的特點及對機體的影響,為完善MDMA法醫(yī)毒理學作用機制奠定理論基礎。
　　【方法】
　　實驗1:
　　1.建立腹腔注射MDMA(20mg/kg)成年SD大鼠染毒模型,實驗組27只,對照組5只。擬將實驗組按染毒后1h、12h和24h分組處死,每組9只。在處死1h組實驗動物后,2~6h內(nèi)有6只大鼠發(fā)生死亡,故將其分為自發(fā)死亡組,剩余12只實驗動物隨機分為12h處死組和24h處死組,每組6只,取腦組織備用;<

3、br>　　2.用高效液相色譜法測定不同時間段各組腦組織內(nèi)5-HT和DA含量;
　　3.用硫代巴比妥酸法和羥胺法分別測定不同組間SOD、MDA的活性;
　　實驗2:
　　1.染毒步驟同實驗1,動物及分組為實驗1中的對照組、1h組、12h組和24h組。
　　2.用HE、TUNNEL及免疫組化的方法染各組腦組織切片,并用WesternBlot方法測定各組Bcl-2、Bax及Caspase-3的含量;
　　實驗3:

4、
　　1.染毒及分組同實驗2
　　2.用RT-PCR和免疫組化的方法測定Ryr2和SERCA2的表達情況。
　　【結果】
　　實驗1:
　　1.染毒大鼠有明顯的毒性反應,染毒后自發(fā)死亡的大鼠均在染毒6h內(nèi)發(fā)生,死亡率為22.22％。
　　2.處死組與自發(fā)死亡組大鼠腦組織5-HT均較對照組降低,1h組與12h組DA與對照組無統(tǒng)計學差異,24h組和死亡組比對照著升高。
　　3.1h組、24h組SOD

5、高于對照組,12h組與對照組無統(tǒng)計學差異;死亡組低于對照組。
　　實驗2:
　　1.TUNNEL染色各實驗組與對照組無顯著性差異。
　　2.各實驗組大鼠腦組織Bcl-2/Bax均高于對照組。
　　3.各實驗組大鼠腦組織Caspase-3均低于對照組。
　　實驗3:
　　1.Ryr2的RT-PCR和免疫組化的結果均是1h組與對照組無統(tǒng)計學差異,12h組和24h組均高于對照組,隨時間的延長,呈逐漸上升的趨

6、勢。
　　2.SERCA2的RT-PCR和免疫組化結果均是1h組、12h組和24h組高于對照組,隨時間的延長,呈逐漸上升的趨勢。
　　【結論】
　　1.MDMA染毒24h內(nèi),可誘發(fā)腦組織抗氧化物質SOD的生成及腦組織的抗凋亡效應。
　　2.MDMA染毒24h內(nèi),可誘發(fā)內(nèi)質網(wǎng)Ca2+通道蛋白Ryr2和SERCA2的表達。
　　3.MDMA染毒24h內(nèi)對腦組織有一定的保護作用,這種保護作用與抗氧化酶SOD、抗凋