HepG2細(xì)胞脂肪變模型中氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生及藥物干預(yù).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分脂肪酸誘導(dǎo)建立HepG2 細(xì)胞脂肪變模型
   目的:建立體外脂肪肝細(xì)胞模型,為針對性地研究非酒精性脂肪肝發(fā)病機制奠定基礎(chǔ)。
   方法:油酸和軟脂酸比例為2 比1 的不同濃度梯度的混合脂肪酸孵育HepG2細(xì)胞,12 小時和24 小時后分別用CCK-8 法測定細(xì)胞活力。0.5mM 和1mM 的混合脂肪酸分別孵育HepG2 細(xì)胞,在不同時間點進(jìn)行油紅O 染色和細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)含量的測定。
   結(jié)果:

2、0.125~0.5mM 的混合脂肪酸對HepG2 細(xì)胞生長沒有明顯抑制作用,1mM 的混合脂肪酸對細(xì)胞毒性較大。油紅O 染色可見脂肪酸組細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴,隨著干預(yù)時間延長染色脂質(zhì)增多,1mM 脂肪酸干預(yù)組在24 小時即可見細(xì)胞有壞死浮起。脂肪酸干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)TG 含量在12 小時起較正常對照組顯著增加(P<0.05)。
   結(jié)論:油酸和軟脂酸比例2:1、濃度為0.5mM 的混合脂肪酸既能誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生明顯的脂肪變性,又不會使細(xì)胞大量

3、裂解死亡,可誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞成功建立脂肪肝細(xì)胞模型。
   第二部分 HepG2 細(xì)胞脂肪變模型中氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生及藥物干預(yù)
   目的:檢測HepG2 細(xì)胞脂肪變模型中氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生情況,探討抗氧化劑維生素E 和分子伴侶4-苯基丁酸(PBA)對其的影響。
   方法:0.5mM 和1mM的混合脂肪酸分別干預(yù)HepG2 細(xì)胞,在不同時間點檢測細(xì)胞內(nèi)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量和超氧化物

4、歧化酶(SOD)、還原型谷胱甘肽(GSH)水平。Real-timePCR 方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物CHOP 和GRP78 mRNA 的表達(dá)水平。將1mg/L 的維生素E 和2mM 的PBA 分別干預(yù)脂肪變性HepG2 細(xì)胞,在不同時間點檢測MDA、SOD、GSH 水平和CHOP、GRP78 mRNA 表達(dá)量的變化。
   結(jié)果:與正常對照組相比,脂肪酸干預(yù)組HepG2 細(xì)胞內(nèi)MDA 含量明顯增加,SOD 和GSH 水平顯著降低,

5、而CHOP、GRP78 mRNA 的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)。維生素E 和PBA 干預(yù)均可使脂肪變性HepG2 細(xì)胞內(nèi)MDA含量明顯下降,SOD 和GSH 水平顯著升高(P<0.05)。PBA 還下調(diào)CHOP 和GRP78 mRNA 的表達(dá)水平(P<0.05),但維生素E 對其表達(dá)無影響。
   結(jié)論:HepG2 細(xì)胞脂肪變性時發(fā)生明顯的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,抗氧化劑維生素E 能減輕氧化應(yīng)激,化學(xué)分子伴侶PBA 兼具有改

6、善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和氧化應(yīng)激的雙重作用。
   第三部分 HepG2 細(xì)胞脂肪變模型中Caspase-3 活性的變化及藥物干預(yù)
   目的:檢測HepG2 細(xì)胞脂肪變模型中Caspase-3 活性的變化,探討抗氧化劑維生素E 和分子伴侶PBA 對其的影響。
   方法:0.5mM 和1mM 的混合脂肪酸分別干預(yù)HepG2 細(xì)胞,在不同時間點檢測細(xì)胞內(nèi)Caspase-3 活性。將1mg/L 的維生素E 和2mM的PBA

7、分別干預(yù)脂肪變性HepG2 細(xì)胞,在相應(yīng)的時間點檢測Caspase-3 活性的變化。
   結(jié)果:脂肪酸組HepG2 細(xì)胞Caspase-3 活性較正常對照組顯著升高(P<0.05),維生素E 和PBA 干預(yù)組細(xì)胞Caspase-3 活性均較脂肪酸組明顯下降(P<0.05)。
   結(jié)論:脂肪酸可誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞Caspase-3 活性升高,抗氧化劑維生素E 和化學(xué)分子伴侶PBA均能下調(diào)脂肪變性HepG2 細(xì)胞Cas

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