

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、第一部分脂肪酸誘導(dǎo)建立HepG2 細(xì)胞脂肪變模型
目的:建立體外脂肪肝細(xì)胞模型,為針對性地研究非酒精性脂肪肝發(fā)病機制奠定基礎(chǔ)。
方法:油酸和軟脂酸比例為2 比1 的不同濃度梯度的混合脂肪酸孵育HepG2細(xì)胞,12 小時和24 小時后分別用CCK-8 法測定細(xì)胞活力。0.5mM 和1mM 的混合脂肪酸分別孵育HepG2 細(xì)胞,在不同時間點進(jìn)行油紅O 染色和細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)含量的測定。
結(jié)果:
2、0.125~0.5mM 的混合脂肪酸對HepG2 細(xì)胞生長沒有明顯抑制作用,1mM 的混合脂肪酸對細(xì)胞毒性較大。油紅O 染色可見脂肪酸組細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴,隨著干預(yù)時間延長染色脂質(zhì)增多,1mM 脂肪酸干預(yù)組在24 小時即可見細(xì)胞有壞死浮起。脂肪酸干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)TG 含量在12 小時起較正常對照組顯著增加(P<0.05)。
結(jié)論:油酸和軟脂酸比例2:1、濃度為0.5mM 的混合脂肪酸既能誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生明顯的脂肪變性,又不會使細(xì)胞大量
3、裂解死亡,可誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞成功建立脂肪肝細(xì)胞模型。
第二部分 HepG2 細(xì)胞脂肪變模型中氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生及藥物干預(yù)
目的:檢測HepG2 細(xì)胞脂肪變模型中氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生情況,探討抗氧化劑維生素E 和分子伴侶4-苯基丁酸(PBA)對其的影響。
方法:0.5mM 和1mM的混合脂肪酸分別干預(yù)HepG2 細(xì)胞,在不同時間點檢測細(xì)胞內(nèi)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量和超氧化物
4、歧化酶(SOD)、還原型谷胱甘肽(GSH)水平。Real-timePCR 方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物CHOP 和GRP78 mRNA 的表達(dá)水平。將1mg/L 的維生素E 和2mM 的PBA 分別干預(yù)脂肪變性HepG2 細(xì)胞,在不同時間點檢測MDA、SOD、GSH 水平和CHOP、GRP78 mRNA 表達(dá)量的變化。
結(jié)果:與正常對照組相比,脂肪酸干預(yù)組HepG2 細(xì)胞內(nèi)MDA 含量明顯增加,SOD 和GSH 水平顯著降低,
5、而CHOP、GRP78 mRNA 的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)。維生素E 和PBA 干預(yù)均可使脂肪變性HepG2 細(xì)胞內(nèi)MDA含量明顯下降,SOD 和GSH 水平顯著升高(P<0.05)。PBA 還下調(diào)CHOP 和GRP78 mRNA 的表達(dá)水平(P<0.05),但維生素E 對其表達(dá)無影響。
結(jié)論:HepG2 細(xì)胞脂肪變性時發(fā)生明顯的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,抗氧化劑維生素E 能減輕氧化應(yīng)激,化學(xué)分子伴侶PBA 兼具有改
6、善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和氧化應(yīng)激的雙重作用。
第三部分 HepG2 細(xì)胞脂肪變模型中Caspase-3 活性的變化及藥物干預(yù)
目的:檢測HepG2 細(xì)胞脂肪變模型中Caspase-3 活性的變化,探討抗氧化劑維生素E 和分子伴侶PBA 對其的影響。
方法:0.5mM 和1mM 的混合脂肪酸分別干預(yù)HepG2 細(xì)胞,在不同時間點檢測細(xì)胞內(nèi)Caspase-3 活性。將1mg/L 的維生素E 和2mM的PBA
7、分別干預(yù)脂肪變性HepG2 細(xì)胞,在相應(yīng)的時間點檢測Caspase-3 活性的變化。
結(jié)果:脂肪酸組HepG2 細(xì)胞Caspase-3 活性較正常對照組顯著升高(P<0.05),維生素E 和PBA 干預(yù)組細(xì)胞Caspase-3 活性均較脂肪酸組明顯下降(P<0.05)。
結(jié)論:脂肪酸可誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞Caspase-3 活性升高,抗氧化劑維生素E 和化學(xué)分子伴侶PBA均能下調(diào)脂肪變性HepG2 細(xì)胞Cas
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在小鼠心肌功能中的研究.pdf
- MiR-107在HepG2細(xì)胞耐受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中的作用.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與細(xì)胞脂肪變性的研究.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高果糖誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂質(zhì)從頭合成中的作用.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與氧化應(yīng)激在膜性腎病中的作用及機制.pdf
- 脂肪酸對肝細(xì)胞損傷機制研究——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及干預(yù).pdf
- 氧化應(yīng)激偶聯(lián)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在氟中毒大鼠生殖損傷中的作用及機制.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在lncRNA MEG3誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡中的作用.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化應(yīng)激在自然流產(chǎn)中的作用.pdf
- 自噬與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激交互在HepG2凋亡過程的新作用.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激—線粒體細(xì)胞凋亡途徑在氟中毒導(dǎo)致的HepG2細(xì)胞凋亡機制中的作用.pdf
- 氧化應(yīng)激對HepG2細(xì)胞HMGB1表達(dá)和釋放的影響.pdf
- DAXX過表達(dá)對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的影響.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在雙氫青蒿素誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡中的作用研究.pdf
- AαC誘導(dǎo)HepG2和A549細(xì)胞基因毒性及氧化應(yīng)激作用研究.pdf
- 異丙酚預(yù)先給藥對HepG2細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響.pdf
- 溴酸鉀對HepG2細(xì)胞的遺傳毒性及氧化應(yīng)激機制的研究.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激偶聯(lián)氧化應(yīng)激信號通路在糖尿病腎病發(fā)病中的作用.pdf
- 熊果酸對煙熏所致肺氣腫大鼠肺組織氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響.pdf
- 肝癌HepG2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激后COX2表達(dá)上調(diào)機制及其抗凋亡機制的研究.pdf
評論
0/150
提交評論