HepG2細胞脂肪變模型中氧化應激和內質網應激的發(fā)生及藥物干預.pdf

1、第一部分脂肪酸誘導建立HepG2 細胞脂肪變模型
　　 目的：建立體外脂肪肝細胞模型，為針對性地研究非酒精性脂肪肝發(fā)病機制奠定基礎。
　　 方法：油酸和軟脂酸比例為2 比1 的不同濃度梯度的混合脂肪酸孵育HepG2細胞，12 小時和24 小時后分別用CCK-8 法測定細胞活力。0.5mM 和1mM 的混合脂肪酸分別孵育HepG2 細胞，在不同時間點進行油紅O 染色和細胞內甘油三酯（TG）含量的測定。
　　 結果：

2、0.125～0.5mM 的混合脂肪酸對HepG2 細胞生長沒有明顯抑制作用，1mM 的混合脂肪酸對細胞毒性較大。油紅O 染色可見脂肪酸組細胞內紅色脂滴，隨著干預時間延長染色脂質增多，1mM 脂肪酸干預組在24 小時即可見細胞有壞死浮起。脂肪酸干預組細胞內TG 含量在12 小時起較正常對照組顯著增加（P<0.05）。
　　 結論：油酸和軟脂酸比例2:1、濃度為0.5mM 的混合脂肪酸既能誘導細胞發(fā)生明顯的脂肪變性，又不會使細胞大量

3、裂解死亡，可誘導HepG2 細胞成功建立脂肪肝細胞模型。
　　 第二部分 HepG2 細胞脂肪變模型中氧化應激和內質網應激的發(fā)生及藥物干預
　　 目的：檢測HepG2 細胞脂肪變模型中氧化應激和內質網應激的發(fā)生情況，探討抗氧化劑維生素E 和分子伴侶4-苯基丁酸（PBA）對其的影響。
　　 方法：0.5mM 和1mM的混合脂肪酸分別干預HepG2 細胞，在不同時間點檢測細胞內過氧化產物丙二醛（MDA）含量和超氧化物

4、歧化酶（SOD）、還原型谷胱甘肽（GSH）水平。Real-timePCR 方法檢測內質網應激標志物CHOP 和GRP78 mRNA 的表達水平。將1mg/L 的維生素E 和2mM 的PBA 分別干預脂肪變性HepG2 細胞，在不同時間點檢測MDA、SOD、GSH 水平和CHOP、GRP78 mRNA 表達量的變化。
　　 結果：與正常對照組相比，脂肪酸干預組HepG2 細胞內MDA 含量明顯增加，SOD 和GSH 水平顯著降低，

5、而CHOP、GRP78 mRNA 的表達水平顯著升高（P<0.05）。維生素E 和PBA 干預均可使脂肪變性HepG2 細胞內MDA含量明顯下降，SOD 和GSH 水平顯著升高（P<0.05）。PBA 還下調CHOP 和GRP78 mRNA 的表達水平（P<0.05），但維生素E 對其表達無影響。
　　 結論：HepG2 細胞脂肪變性時發(fā)生明顯的氧化應激和內質網應激，抗氧化劑維生素E 能減輕氧化應激，化學分子伴侶PBA 兼具有改

6、善內質網應激和氧化應激的雙重作用。
　　 第三部分 HepG2 細胞脂肪變模型中Caspase-3 活性的變化及藥物干預
　　 目的：檢測HepG2 細胞脂肪變模型中Caspase-3 活性的變化，探討抗氧化劑維生素E 和分子伴侶PBA 對其的影響。
　　 方法：0.5mM 和1mM 的混合脂肪酸分別干預HepG2 細胞，在不同時間點檢測細胞內Caspase-3 活性。將1mg/L 的維生素E 和2mM的PBA

7、分別干預脂肪變性HepG2 細胞，在相應的時間點檢測Caspase-3 活性的變化。
　　 結果：脂肪酸組HepG2 細胞Caspase-3 活性較正常對照組顯著升高（P<0.05），維生素E 和PBA 干預組細胞Caspase-3 活性均較脂肪酸組明顯下降（P<0.05）。
　　 結論：脂肪酸可誘導HepG2 細胞Caspase-3 活性升高，抗氧化劑維生素E 和化學分子伴侶PBA均能下調脂肪變性HepG2 細胞Cas