銅對大鼠腦微血管內皮細胞緊密連接蛋白及氧化應激的影響.pdf

1、銅是動物機體必需的微量元素之一。在大腦中，銅參與大量的生物進程，為機體發(fā)揮正常的生理功能扮演著重要的角色。但是，許多神經中樞疾病，特別是神經退行性疾病也與銅息息相關。為探究銅與大腦之間的密切關系，本試驗通過原代培養(yǎng)腦微血管內皮細胞（brain microvascular endothelial cells，BMECs）建立體外模型，以30μM、60μM、120μM、180μM、240μM、300μM共6個不同濃度的CuCl2作用于BME

2、Cs12 h，從細胞毒性、claudin-1、-3、-5的蛋白水平、基因水平和細胞氧化應激相關的酶活水平幾個層面來評估不同濃度的銅對BMECs的影響。結果顯示：
　　1.通過牛血清白蛋白梯度離心和Ⅱ型膠原酶消化的方法分離原代BMECs的方法得當，特異性抗原Ⅷ因子免疫熒光鑒定呈陽性，鈣粘蛋白 CD144流式細胞術鑒定細胞純度高達99％以上。
　　2.銅離子濃度的升高使BMECs的細胞活力呈現先上升后下降的趨勢，120μM銅離子

3、濃度組的細胞活力在各個銅離子濃度組中居于高峰（63%）。胞外乳酸脫氫酶的活性測定結果與細胞活力的變化趨勢相一致。另外，BMECs對生長的條件與環(huán)境要求較高，不添加胎牛血清的陰性組也會使細胞活力大幅度下降。
　　3. Claudin-1、-3、-5隨著銅離子濃度升高呈現出相似的蛋白表達變化趨勢，均是從低濃度銅離子組到中間濃度銅離子組呈現下調，在180μM銅離子濃度組達到低峰，從中間濃度銅離子組到高濃度銅離子組又呈現上調。
　　

4、4. Claudin-1、-3、-5的mRNA相對表達量雖然相比于陰性組有著統(tǒng)計學上的差異，但是各個銅離子濃度組之間并沒有明顯的趨勢變化。
　　5.在氧化應激的過程中，銅鋅-超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）是BMECs的超氧化物歧化酶（SOD）主要分型，隨著銅離子濃度的升高，CuZn-SOD活性提高，但是銅負載可能存在一個臨界點，在120μM銅離子濃度組之后的Cu-SOD活性呈現下降。從整體上看，過氧化物酶（CAT）活性隨著銅離

5、子濃度的提高而下降，在300μM銅離子濃度組降至最低點。誘導型一氧化氮合酶（iNOS）是BMECs的一氧化氮合酶（NOS）主要分型，隨著銅離子濃度的提高，iNOS的活性在120μM銅離子濃度組達到高峰，隨后又呈下降趨勢。
　　結論：銅離子易對BMECs產生細胞毒性，但是可能存在最適濃度的銅離子能夠協(xié)助BMECs修復。銅離子能夠介導影響claudin-1、-3、-5的蛋白表達水平，且與濃度有密切關聯(lián)。銅離子會對BMECs造成氧化損傷