靈芝中一種DNase的特征和MT基因序列分析.pdf

1、福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文靈芝中一種DNase的特征和MT基因序列分析姓名：謝東揚(yáng)申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：謝聯(lián)輝林奇英20070401福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文摘要靈芝(Ganodermalucidum)含有豐富的活性物質(zhì)，是2000年‘中華人民共和國藥典》收錄的重要中藥品種。目前，以靈芝為材料的研究主要集中在多糖和小分子活性物質(zhì)的提取及其功效方面，對功能性蛋白研究甚少。因此，從靈芝中發(fā)現(xiàn)新的活性蛋白和基因?qū)μ岣哽`芝的藥

2、理價(jià)值、拓寬其應(yīng)用渠道具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分：I、靈芝中一種脫氧核糖核酸酶的純化及其生物活性分析。II、靈芝金屬硫蛋白的基因克隆和序列分析。I、靈芝中一種新的脫氧核糖核酸酶的純化及生物活性分析：1分離純化；主要通過硫酸銨鹽析，親和層析和離子交換層析方法從靈芝中分離純化一種脫氧核糖核酸酶，命名為GLDNase。質(zhì)譜分析其精確分子量為13807Da。SDSPAGE檢測為單亞基多肽，等電點(diǎn)為pH66，糖含量為27％。2N端氨基酸序列

3、分析：GLDNase的N端的氨基酸序列為PLDTGRYHl刑廠】吖cDGG。在GeneBank中采用Blast分析沒有找到N端氨基酸與其同源的多肽，說明GLDNase是一種新的蛋白質(zhì)。3肽指紋圖譜：經(jīng)胰蛋白酶酶解后迸行肽質(zhì)量指紋譜的分析，得到兩個(gè)肽段，其氨基酸序列分別為QVETvVDRLDEIJPIR和ESPGLQGVSSVPLR。序列分析表明這兩個(gè)片段分別與DNA聚合酶lI和二氫硫辛酰胺脫氫酶的部分氨基酸序列存在較高的同源性。4脫氧核

4、糖核酸酶活性分析：GLDNase可作用于超螺旋DNA，加NA，ssDNA和dsDNA。通過對超螺旋DNA，九DNA的作用與時(shí)間的關(guān)系分析，GLDNase可將超螺旋DNA切割成環(huán)狀DNA和線狀DNA；降解7DNA時(shí)，沒有產(chǎn)生特異性條帶，說明GLDNase是一種非限制性內(nèi)切酶。GLDNase酶活性依賴于二價(jià)金屬陽離子Mg“，濃度為5mmoLL1時(shí)活性最高；10mmoLL1EDTA可完全抑制其酶活性；GLDNasc最適pH范圍為pH80一pH