C2C12細(xì)胞中FHL3對不同肌纖維類型MyHC基因表達的影響.pdf

1、肌纖維類型在決定肌肉生長和肉質(zhì)方面起著重要作用,不同纖維類型肌球蛋白重鏈(MyHC)基因,如MyHC slow、MyHC2a、MyHC2x和MyHC2b,是目前公認(rèn)的區(qū)分不同肌肉纖維類型的分子標(biāo)記,因此發(fā)現(xiàn)調(diào)控不同肌纖維類型MyHC基因表達的基因及其分子機制,對提高瘦肉產(chǎn)量和品質(zhì)具有重要意義。FHL3蛋白屬于LIM超家族,可通過與MyoD、CREB等重要蛋白相互作用參與調(diào)節(jié)肌細(xì)胞分化、細(xì)胞骨架形成以及下游基因表達。但有關(guān)FHL3是否調(diào)控

2、MyHC基因表達尚不清楚。本研究以小鼠C2C12成肌細(xì)胞為模型,研究干涉FHL3基因后不同纖維類型MyHCmRNA水平上的表達變化。具體結(jié)果如下:
　　 1、通過熒光實時定量PCR和Western Blotting技術(shù)研究了FHL3基因和MyHC1、2a、2x和2b基因在細(xì)胞分化0h、48h、96h和144h的變化情況:在成肌細(xì)胞向肌管分化過程中,FHL3基因表達量逐漸減少,而MyHC slow基因在肌管形成初期表達量急劇增加,

3、肌管完全形成后又有所下降；MyHC2a基因隨著細(xì)胞的分化表達量逐步增加,在肌管形成后表達量最高；MyHC2b和MyHC2x基因也是隨著細(xì)胞的分化表達量增加,但分化前期變化較小,到肌管基本形成時期表達量陡增。
　　 2、利用siRNA小片段進行干擾試驗,篩選出其中的siRNAs＃3對FHL3的干涉效果較好。并用siRNA#3轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后分化24h、48h、72h,結(jié)果分化24h和48h細(xì)胞的FHL3相對表達量顯

4、著降低。
　　 3、利用siRNA#3轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后分化72h,結(jié)果顯示MyHC slow和MyHC2a的表達量顯著降低,MyHC2x的表達卻顯著升高而MyHC2b的表達無顯著性變化。而用siRNA#3轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48h后分化48h,結(jié)果MyHC slow表達量顯著降低,MyHC2b和MyHC2x的表達量顯著增加,而MyHC2a表達降低不明顯。比較以上結(jié)果發(fā)現(xiàn),其中MyHC slow和MyHC2x在

5、兩種處理的表達變化較一致。
　　 4、利用siRNA#3轉(zhuǎn)染分別分化24h、48h和72h的C2C12細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后繼續(xù)分化48h,結(jié)果分化24h和48h細(xì)胞的FHL3的表達量分別顯著和極顯著降低,對應(yīng)的MyHC slowr和MyHC2a的表達量也均顯著和極顯著降低。與以上結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),MyHC slow的表達量均隨FHL3表達的降低而降低。
　　 本試驗結(jié)果顯示在C2C12細(xì)胞中降低FHL3對MyHC基因有顯著的影響,F