Arx的表達與C2C12細胞分化的關系.pdf

1、同源異型蛋白是一類含有60個氨基酸長度的同源異型結構域的重要轉錄因子。Arx(Aristaless-relatedhomeobox)是同源異型結構域家族蛋白中的成員，在生長發(fā)育中起著關鍵的作用，與胰腺，底板，前腦，性腺和老鼠胚胎肌肉的發(fā)育有關。前期研究發(fā)現(xiàn)在C2C12細胞分化過程中內(nèi)源的Arx有出核的現(xiàn)象。通過異核體實驗證明Arx是一個核質(zhì)穿梭的蛋白質(zhì)，然而在C2C12分化過程中Arx的表達量變化以及Arx的表達對于C2C12的影響還不

2、清楚。
　　本篇論文以小鼠成肌細胞系C2C12細胞為模型進行研究。從蛋白質(zhì)水平和RNA水平上證明了內(nèi)源Arx的表達量在C2C12細胞分化過程中沒有變化。然而，免疫熒光實驗證明C2C12細胞分化過程中Arx能夠從細胞核進入細胞質(zhì)中，而且過表達Arx能夠抑制C2C12細胞的分化，將內(nèi)源的ARX敲除之后能夠促進C2C12細胞的分化。我們猜測Arx作為轉錄因子對下游靶基因調(diào)控進而影響細胞分化。通過數(shù)據(jù)庫篩選我們找到SIX1基因，有研究表明

3、SIX1基因缺失的小鼠其肌細胞分化停滯，Six1在C2C12細胞分化過程中表達水平上調(diào)。我們在C2C12細胞中過表達Six1之后，發(fā)現(xiàn)細胞的分化水平升高;敲除了SIX1之后，細胞的分化受到抑制。另外，我們發(fā)現(xiàn)SIX1基因的啟動子區(qū)含有Arx的結合位點TAATTA，通過熒光素酶活性測定和EMSA實驗，我們證實了Arx能夠特異結合SIX1的啟動子區(qū)。通過Westernblot和半定量RT-PCR實驗證明，在C2C12細胞中過表達Arx之后，