偏側(cè)咀嚼對大鼠咬肌肌纖維表型及MyHC異構(gòu)型基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　通過建立大鼠偏側(cè)咀嚼動物模型，探查偏側(cè)咀嚼對咬肌肌纖維表型特征的影響，探討偏側(cè)咀嚼狀態(tài)下咬肌肌纖維肌球蛋白重鏈(myosin heavy chain，MyHC)異構(gòu)型基因表達(dá)水平的變化；分析MyHC異構(gòu)型蛋白的基因表達(dá)水平的變化與肌纖維表型的相關(guān)性，闡明偏側(cè)咀嚼對咀嚼肌結(jié)構(gòu)和生理特征的影響，為揭示咬合異常所致咀嚼肌結(jié)構(gòu)與功能紊亂的致病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　SPF級8周齡雄性SD大鼠40只，隨機(jī)

2、分為8組，每組5只。分別為單側(cè)拔牙建模2、4、6及8周組，以上各組均設(shè)立同期對照組。單側(cè)拔牙模型組大鼠在1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉下拔除右上頜所有磨牙，建立偏側(cè)咀嚼模型。應(yīng)用肌球蛋白三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase，ATPase)染色法檢查大鼠咬肌肌纖維表型特征，觀察各亞型肌纖維的空間定位、分布與排列，并利用圖像分析軟件和統(tǒng)計(jì)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行量化處理；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測MyHC各異構(gòu)型蛋白的基

3、因相對表達(dá)量；對咬肌各亞型肌纖維的含量與MyHC各異構(gòu)型蛋白的基因相對表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　ATPase染色結(jié)果表明正常SD雄性大鼠咬肌主要由ⅡA型肌纖維組成，約占64%。在大量ⅡA型纖維分布區(qū)域，含有27%左右的ⅡB型纖維。Ⅰ型肌纖維約占9%，且主要分布于咬肌深部。在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)不同周齡的正常大鼠上述肌纖維亞型比例無明顯變化。偏側(cè)咀嚼模型建立后，雙側(cè)咬肌均出現(xiàn)肌纖維各亞型比例及MyHC各異構(gòu)型蛋白mRNA表

4、達(dá)水平的變化，其變化呈現(xiàn)出雙側(cè)不對稱性及隨時(shí)間推移的動態(tài)性變化。建模后2周，雙側(cè)咬肌Ⅰ型肌纖維比例及MyHC-ⅠmRNA表達(dá)水平均上調(diào)，且兩者在非拔牙側(cè)的表達(dá)均高于拔牙側(cè)(P<0.05)，而ⅡA型肌纖維的構(gòu)成比下降，提示快縮氧化型肌纖維向慢縮氧化型肌纖維的轉(zhuǎn)化，但MyHC-Ⅱa mRNA表達(dá)無明顯變化。建模后期，與對照組比較，拔牙側(cè)Ⅰ型肌纖維的比例及MyHC-Ⅰ基因表達(dá)持續(xù)上調(diào)(P<0.05)，而ⅡA型肌纖維比例呈現(xiàn)下降趨勢(P<0.0

5、5)；在非拔牙側(cè)，MyHC各型肌纖維比例及基因表達(dá)水平則基本恢復(fù)至正常水平。雙側(cè)咬肌Ⅰ型、ⅡA型肌纖維的比例及 MyHC-Ⅰ基因表達(dá)水平比較差異具有顯著性(P<0.05)。ATPase染色結(jié)果與MyHC異構(gòu)型mRNA表達(dá)水平的變化具有相對的一致性。
　　結(jié)論：
　　正常大鼠咬肌肌纖維以ⅡA型纖維為主，表現(xiàn)為快速收縮而不易疲勞的生理特性；偏側(cè)咀嚼可使大鼠咬肌肌纖維表型特征發(fā)生改變，且伴有肌纖維 MyH C各異構(gòu)型基因表達(dá)水平的