周期性牽張力、乙酰膽堿對C2C12細(xì)胞MEF2A表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:頜面部相關(guān)治療,如正畸中的功能矯治,可能引起頜骨位置的改變,從而改變口頜系統(tǒng)肌群的功能狀況。肌細(xì)胞感覺和傳導(dǎo)各種刺激信號,使細(xì)胞核的基因轉(zhuǎn)錄過程發(fā)生改變從而刺激肌肉特異基因的表達(dá),調(diào)控肌纖維整合的一系列反應(yīng),而使細(xì)胞的結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞外與肌纖維有關(guān)的神經(jīng)、血管等發(fā)生相應(yīng)的結(jié)構(gòu)-功能適應(yīng)性改建,這也是各種相關(guān)治療成功及穩(wěn)定的一個(gè)關(guān)鍵因素。因此摸索合適的牽張及神經(jīng)刺激,促進(jìn)骨骼肌的分化改建,以適應(yīng)新的頜位,對于功能矯治等治療有重要意義

2、。牽張力和神經(jīng)刺激作用下的肌肉組織細(xì)胞應(yīng)答機(jī)制也成為口腔正畸基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)之一。
　　 肌細(xì)胞增強(qiáng)子2(MEF2)是多種調(diào)節(jié)肌肉特異性轉(zhuǎn)錄基因中一個(gè)重要的調(diào)節(jié)因子,MEF2可以激活多種肌肉相關(guān)基因的表達(dá),這些基因的表達(dá)產(chǎn)物對于肌肉組織的分化、維持和再生等有重要作用。MEF2因C端轉(zhuǎn)錄活性區(qū)的特異性而有不同的分型,MEF2A是在骨骼肌中主要表達(dá)的亞型之一,對MEF2A表達(dá)的研究是對肌肉組織細(xì)胞應(yīng)答機(jī)制研究的重要組成部分。
　

3、　 研究目的:本研究以小鼠成肌細(xì)胞株C2C12為研究對象,觀察周期性牽張力及乙酰膽堿刺激,對C2C12細(xì)胞MEF2A mRNA和蛋白表達(dá)的影響,探討其間可能存在的力學(xué)信號與刺激因素的關(guān)系。
　　 研究方法:本研究第一部分建立C2C12細(xì)胞力學(xué)刺激模型,對C2C12細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)觀察其增殖情況,確定其生長期和加力前的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間。第二部分檢測周期性牽張力、乙酰膽堿作用對于C2C12細(xì)胞MEF2AmRNA和P-MEF2A蛋白表達(dá)

4、變化的影響:實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測MEF2A基因轉(zhuǎn)錄水平,Western Bloting檢測P-MEF2A蛋白表達(dá)水平。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.C2C12細(xì)胞在培養(yǎng)過程48h后出現(xiàn)增殖加速,培養(yǎng)96h后細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制而使增殖速度減慢,同時(shí)C2C12細(xì)胞在加力板上生長增殖良好,可以選擇培養(yǎng)48～96h的細(xì)胞移種到加力板培養(yǎng)備用。
　　 2.對C2C12施加周期性牽張力及牽張力聯(lián)合乙酰膽堿刺激12h內(nèi),M

5、EF2AmRNA的表達(dá)表現(xiàn)出增高的趨勢,但表達(dá)差異未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各加力時(shí)間段之間,MEF2A mRNA的表達(dá)差異也未發(fā)現(xiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05).
　　 3.對C2C12細(xì)胞加入乙酰膽堿,未能引起MEF2A mRNA表達(dá)的明顯變化。表達(dá)差異未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　 4.施加牽張力12h以內(nèi),P-MEF2A蛋白表達(dá)表現(xiàn)為增高的趨勢,加力組1h、2h P-MEF2A蛋白的表達(dá)增高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

6、0.05),各加力時(shí)間段之間,P-MEF2A蛋白的表達(dá)差異未發(fā)現(xiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　 5.對C2C12細(xì)胞施加乙酰膽堿聯(lián)合牽張力刺激,引起P-MEF2A蛋白表達(dá)的增高的趨勢,1h、4h表達(dá)增高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 周期性牽張力及牽張力聯(lián)合乙酰膽堿作用,在作用早期引起MEF2A表達(dá)的變化,是促進(jìn)成肌細(xì)胞成肌機(jī)制的有利因素。周期性牽張力及牽張力聯(lián)合乙酰膽堿刺激啟動(dòng)了M