NK細(xì)胞受體與宿主MHC Ⅰ類分子匹配程度對骨髓移植后造血重建的影響.pdf

1、自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK細(xì)胞)是機(jī)體天然免疫細(xì)胞，可以清除體內(nèi)變異細(xì)胞，包括惡性病變和被病原體感染的細(xì)胞，可直接識(shí)別機(jī)體內(nèi)的正常和異常細(xì)胞，進(jìn)而對機(jī)體內(nèi)的異常信號(hào)做出快速反應(yīng)。
　　一般認(rèn)為，NK細(xì)胞通過其細(xì)胞表面的NK細(xì)胞受體來區(qū)分正常和異常細(xì)胞。NK細(xì)胞表面表達(dá)NK細(xì)胞免疫球蛋白受體(注釋:killer cell immunoglobulin-likereceptor，KIR)，能特異性識(shí)別并

2、結(jié)合其他細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合體（注釋:major histocompatibility complex，MHC）Ⅰ類分子。KIR分為抑制型和活化型兩種，分別向細(xì)胞內(nèi)傳遞抑制性信號(hào)和活化性信號(hào)，共同調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的殺傷活性。目前公認(rèn)的理論為“Missing Self”機(jī)制:機(jī)體的正常細(xì)胞表達(dá)大量的MHCⅠ類分子，他們與NK細(xì)胞表面的抑制型KIR結(jié)合，抑制NK細(xì)胞活性;在某些癌變或者病毒感染細(xì)胞MHCⅠ類分子表達(dá)減少時(shí)，不能有效抑制N

3、K細(xì)胞的殺傷功能，導(dǎo)致其被活化的NK細(xì)胞清除。
　　在臨床中骨髓移植(注釋:bone marrow transplantation，BMT)是治療血液系統(tǒng)中良惡性疾病的有效手段。有研究得出來源于供者的NK細(xì)胞可以清除受者體內(nèi)的白血病細(xì)胞。本課題組前期研究表明，NK細(xì)胞可以減少移植物抗宿主病的發(fā)生，同時(shí)因?yàn)镹K細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)往往依賴于其受體與配體的識(shí)別及匹配程度，故該效應(yīng)與自然殺傷細(xì)胞KIR和受者M(jìn)HCⅠ類分子匹配程度有關(guān)。

4、>　　本研究重點(diǎn)關(guān)注NK細(xì)胞KIR與MHCⅠ類分子的匹配程度對骨髓移植后造血重建的影響研究。NK細(xì)胞作為稀有淋巴細(xì)胞亞群，在外周血和脾臟中含量極少，想要獲得足夠治療用量的NK細(xì)胞，需要對其進(jìn)行分離純化和體外擴(kuò)增培養(yǎng)。本研究中使用密度梯度離心和免疫磁珠(MACS)兩種NK細(xì)胞分選技術(shù)，和使用血小板裂解液(platelet lysate，PL)對NK細(xì)胞進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)的方法，獲得了大量高純度的NK細(xì)胞。
　　為了進(jìn)一步研究allo-

5、NK細(xì)胞在骨髓移植中的作用，擬采用動(dòng)物模型來觀察allo-NK細(xì)胞受體與宿主MHCⅠ類分子的匹配程度對骨髓移植后移植物植入的影響和機(jī)制。進(jìn)行該研究首先要建立骨髓移植模型，移植前的預(yù)處理是供體植入的必要條件，不同的預(yù)處理強(qiáng)度對骨髓移植預(yù)后具有顯著影響。
　　本研究中選用全身輻照（注釋:total body irradiation，TBI）進(jìn)行預(yù)處理，利用3Gy和6Gy不同強(qiáng)度60Coγ射線全身照射BALB/c和CB6F1雌性小鼠，制

6、備成清髓和非清髓兩種模型，然后通過尾靜脈輸入供者C57BL/6J雄性小鼠的骨髓細(xì)胞，通過觀察受者的生存期、嵌合率等情況，確定骨髓移植動(dòng)物模型的最佳預(yù)處理強(qiáng)度。研究結(jié)果6Gy預(yù)處理的對照組小鼠在觀察期內(nèi)全部死亡，進(jìn)行骨髓移植后的實(shí)驗(yàn)組小鼠生存率在90％以上，并且6Gy預(yù)處理的骨髓移植小鼠外周血中的白細(xì)胞和血小板水平適宜進(jìn)行造血重建的觀察。
　　為了觀察供鼠NK細(xì)胞受體與受鼠MHCⅠ類分子匹配程度對骨髓移植小鼠造血重建的影響。分離了3

7、0只C57BL/c小鼠的骨髓細(xì)胞和NK細(xì)胞，輸給經(jīng)過預(yù)處理的BALB/c和CB6F1小鼠，受鼠被分為單純輻照組、輸入骨髓細(xì)胞組和輸入骨髓細(xì)胞及NK細(xì)胞組三組，6只/組，觀察不同時(shí)間點(diǎn)血常規(guī)、生存時(shí)間、病理組織學(xué)等指標(biāo)變化，進(jìn)行組間比較。結(jié)果顯示:輸入骨髓細(xì)胞、骨髓細(xì)胞及NK細(xì)胞組小鼠均長期存活，也未見GVHD病理學(xué)改變。移植后第14天時(shí)，輸入骨髓細(xì)胞組和輸入骨髓細(xì)胞及NK細(xì)胞組的BALB/c小鼠(MHCⅠ類分子完全不相合)外周血白細(xì)胞計(jì)

8、數(shù)分別為:(1.35±0.33)×109/L和(1.80±0.18)×109/L，兩組之間具有顯著性差異，血小板計(jì)數(shù)分別為:(79±19)×109/L和(117±13)×109/L，兩組之間具有顯著性差異;輸入骨髓細(xì)胞組和輸入骨髓細(xì)胞及NK細(xì)胞組的CB6F1小鼠（MHCⅠ類分子半相合）外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為:(1.52±0.26)×109/L和(1.85±0.34)×109/L，兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血小板計(jì)數(shù)分別為(90±12)×