非清髓單倍體相合骨髓移植后NK細胞參與急性移植物抗宿主病的免疫病理學研究.pdf

1、移植物抗宿主病是影響同種異基因造血干細胞移植患者生存、復發(fā)及生活質量的主要并發(fā)癥。急性移植物抗宿主病（aGVHD）主要影響受者肝臟、皮膚、腸道等臟器功能。減低毒性的非清髓預處理方案既能獲得較好的治療效果又可降低移植相關毒性，主要應用于老年患者。單倍體相合造血干細胞移植因解決了供髓來源問題而擁有良好的臨床治療優(yōu)勢。NKp46是NK細胞的活化性受體之一，其表達水平與殺傷活性密切相關[1]，活化的NK細胞具有很強的殺傷腫瘤細胞的作用。NK細胞

2、是同種異基因造血干細胞移植后首先恢復的免疫細胞[2-3]，其在aGVHD病理損傷方面的機制尚未見深入研究。
　　NK細胞殺傷作用無MHC限制性、無需抗原刺激[4]，在造血干細胞移植中的作用備受關注，多數(shù)研究認為NK細胞在造血干細胞移植后發(fā)揮GVL效應的同時可減輕aGVHD。NK細胞通過其免疫球蛋白樣受體（KIR）和HLA-Ⅰ類分子錯配在移植后殺傷受者樹突狀細胞阻斷了其向供者T細胞提呈宿主抗原的過程而減輕移植物抗宿主病，供者衍生的N

3、K細胞通過裂解宿主T淋巴細胞來阻止對移植物的排斥[5]。NK細胞也參與移植并發(fā)癥的轉歸，通過分泌IFN-γ及直接的毒性作用在控制巨細胞病毒的感染中發(fā)揮積極作用[6-7]，消化道黏膜中存在特殊的NK細胞亞群，可促進消化道aGVHD損傷后的黏膜再生[8]，Small C研究認為肺部的NK細胞可以發(fā)揮抗感染和促進上皮細胞再生來參與移植后肺部感染的抵抗和修復[9]。本研究以小鼠非清髓單倍體相合骨髓移植模型為對象，探討NK細胞在aGVHD靶器官部

4、位的免疫病理及NKp46表達強度與aGVHD發(fā)生的關系。
　　以C57BL/6（H-2b,♂）為供鼠，CB6F1(Balb/c×C57BL/6, H-2b/d，♀)為受鼠，建立非清髓單倍體相合骨髓移植動物模型。將受鼠按預處理方式分為單次全身照射組與分次全身照射組，每組均分為3組：對照組、小劑量移植組、大劑量移植組。單次照射組小鼠接受環(huán)磷酰胺200 mg.kg-1（-2,-1 d）腹腔注射及60Co450cGy全身照射（0 d），照

5、射劑量率為133 cGy.min-1。分次照射組小鼠移植前接受環(huán)磷酰胺200 mg.kg-1（-1 d）腹腔注射及60Co200 cGy分次全身照射（-2,-1 d,兩次照射間隔24 h，照射劑量率為66 cGy.min-1。移植當天CB6F1接受供鼠骨髓細胞3×107和脾臟細胞6×107或1×108尾靜脈注射移植，對照組小鼠注射等體積生理鹽水。移植后觀察小鼠發(fā)生aGVHD的癥狀體征、流式細胞測定移植嵌合率及NKp46表達強度，采集發(fā)生

6、aGVHD小鼠皮膚、肝臟、腸道靶器官標本HE染色觀察病理學改變、免疫熒光染色觀察靶器官部位NK細胞分布。預處理單次全身照射組小鼠大小劑量移植均未發(fā)生aGVHD，預處理分次全身照射小鼠80％發(fā)生了aGVHD。移植后15 d分次全身照射組小鼠已100%達到完全嵌合，第25 d左右小鼠出現(xiàn)了體重減輕、聳毛、弓背、活動度減低、皮毛不完整等aGVHD典型表現(xiàn)。NK細胞活化受體NKp46平均熒光強度值在小鼠出現(xiàn)aGVHD癥狀后的兩次檢測中，發(fā)生aG