蔬菜病害生防菌的篩選、鑒定及其拮抗物質(zhì)理化性質(zhì)研究.pdf

1、目前,國(guó)內(nèi)外防治蔬菜病害以化學(xué)防治為主?；瘜W(xué)農(nóng)藥的大量使用,在控制病害同時(shí)也造成了環(huán)境污染、農(nóng)產(chǎn)品有毒物質(zhì)殘留、危害人類(lèi)健康和病原菌產(chǎn)生抗藥性等問(wèn)題,嚴(yán)重制約了農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。因此,尋找安全、有效的病害防治途徑,是當(dāng)前病害防治研究的重點(diǎn)。研究表明,生物防治是其中一種有效的防治途徑。本研究從蔬菜根際土壤中分離篩選到一株具廣譜抗性和促生長(zhǎng)作用的生防細(xì)菌XJ。從菌種的分離篩選、鑒定、搖瓶發(fā)酵工藝和拮抗物質(zhì)理化性質(zhì)等方面進(jìn)行了研究。結(jié)果如下:

2、
　　 1.采用梯度稀釋分離法,從浙江、福建、江西等地采集的160多份蔬菜根際土壤中分離獲得712株細(xì)菌。以禾谷鐮刀菌為指示菌,采用平板對(duì)峙法從分離到的712株細(xì)菌中篩選獲得30株可以抑制禾谷鐮刀菌生長(zhǎng)的生防菌,其中有10株細(xì)菌對(duì)病原菌的抑制率達(dá)70％以上。采用平皿促生長(zhǎng)法從30株生防菌中篩選出9株能促進(jìn)黃瓜根生長(zhǎng)的菌株。
　　 2.采用溫室盆栽試驗(yàn)對(duì)初篩獲得的9株生防菌進(jìn)行促生試驗(yàn)。結(jié)果表明,9株生防菌對(duì)黃瓜的生長(zhǎng)都有

3、促進(jìn)作用,其中以AT2的促生長(zhǎng)效果最好。通過(guò)溫室盆栽試驗(yàn)篩選在黃瓜植株上有防病效果的生防菌。試驗(yàn)結(jié)果表明,生防菌XJ、DE2、BN83個(gè)菌株對(duì)黃瓜炭疽病都有一定防治效果,其中以菌株XJ的防治效果最好。
　　 3·采用形態(tài)特征及生理生化檢測(cè)和16S rDNA序列分析等方法,對(duì)生防菌XJ進(jìn)行菌種鑒定。形態(tài)特征和生理生化鑒定顯示,XJ屬于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)；16SrDNA序列測(cè)定和分析結(jié)果表明,XJ與枯

4、草芽孢桿菌(B.subtilis)的同源性達(dá)99％。因此,兩種鑒定方法的結(jié)果一致,菌株XJ為枯草芽孢桿菌(B.subtilis)。
　　 4.通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)菌株XJ的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明,XJ菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳配方為:蔗糖3％,蛋白胨1.5％,黃豆餅粉1％,K2HPO40.4％。同時(shí)對(duì)菌株XJ的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明XJ菌株最佳發(fā)酵條件為:發(fā)酵溫度是37℃,初始pH值為9.0,接種量為2％,裝液量為7

5、5mL/300 mL,搖床轉(zhuǎn)速為200 rpm,發(fā)酵時(shí)間24 h。
　　 5.通過(guò)對(duì)XJ的拮抗物質(zhì)的定位研究發(fā)現(xiàn),XJ產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)是胞外物質(zhì)。通過(guò)硫酸銨分級(jí)鹽析法對(duì)XJ產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)進(jìn)行了提取,發(fā)現(xiàn)當(dāng)硫酸銨飽和度為20％時(shí),沉淀的拮抗活性最大,隨著硫酸銨飽和度增加,沉淀的拮抗活性逐漸減弱。當(dāng)硫酸銨飽和度達(dá)到80％時(shí),沉淀基本無(wú)拮抗活性,因此,采用60％飽和度的硫酸銨基本可以將活性物質(zhì)全部沉淀下來(lái)。對(duì)拮抗物質(zhì)的理化性質(zhì)初步研究表