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文檔簡介
1、柑橘青霉病和梨黑斑病是柑橘、梨果實(shí)貯藏期的主要侵染性病害,是造成腐爛損失的重要原因。長期以來,使用化學(xué)殺菌劑一直被認(rèn)為是防治果實(shí)采后病害最有效的方法,但是存在著農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染和病原菌抗藥性等諸多弊端,迫切需要新的安全的保鮮方法來取代化學(xué)殺菌劑的使用。生物防治是選擇對(duì)產(chǎn)品以及人體不造成危害的微生物,利用微生物之間的拮抗作用,抑制病原菌生長的一種有效防治采后病害的新途徑。 本研究旨在分離、篩選能夠抑制果實(shí)采后青霉、鏈格孢霉的拮抗
2、菌株,鑒定其生物學(xué)特性,并測(cè)定所篩選出的菌株YF1,YF4和BF2及不同混配處理對(duì)柑橘青霉病和梨黑斑病的抑制效果,以及在果實(shí)傷口的定殖情況,并對(duì)其保鮮機(jī)理進(jìn)行初步探討。主要結(jié)果如下: 1.拮抗菌的分離和篩選:用稀釋平板法,從果實(shí)傷口、果實(shí)表面、葉片以及果園根際土壤中分離得到102個(gè)菌株。應(yīng)用平板對(duì)峙法,通過初篩和復(fù)篩,離體篩選出10個(gè)菌株對(duì)青霉菌(Penicillium italicum)有拮抗作用,9個(gè)菌株對(duì)鏈格孢霉 (Alt
3、ernaria kilcuchiana)有拮抗作用。進(jìn)一步通過果實(shí)接種法,活體篩選出分別能明顯抑制青霉和鏈格孢霉的拮抗菌YF1,YF2和:BF2,室溫(約25℃)下抑菌率分別為79.12%,62.5%和66.67%。 2.拮抗菌的鑒定:根據(jù)酵母菌的形態(tài)特征、營養(yǎng)特征和生理特性,鑒定拮抗菌YFl為假絲酵母屬(Candida sp),YF4為檸檬形克勒克酵母(Kloeckera apieulata)。在對(duì)拮抗菌BF2的鑒定中,首先采
4、用細(xì)菌傳統(tǒng)的鑒定方法,對(duì)菌體的表型、生理生化特征進(jìn)行了分類鑒定,結(jié)果發(fā)現(xiàn),BF2符合芽孢桿菌屬細(xì)菌的特征。進(jìn)而采用16S rDNA分子鑒定方法,通過同源性比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育分析,鑒定拮抗菌BF2為芽孢桿菌屬的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)。 3.拮抗菌的抑菌試驗(yàn):當(dāng)拮抗菌濃度為10<'6>-10<'8>CFU/mL時(shí),生物防治的效果與拮抗菌的濃度成正相關(guān);分別在接種1×10<'8> CFU/mL拮抗菌YF1、YF4和
5、BF2的前48 h,24 h,2 h,0 h、后2 h,24 h,48 h接種病菌,同時(shí)和推后病菌接種時(shí)間,都可以維持抑菌效果,但是提前接種病菌拮抗菌的抑菌力會(huì)有所降低。拮抗菌的接種時(shí)間越早防治病害的效果越明顯;YF1與YF4等體積混合用于防治青霉病,果實(shí)發(fā)病率為12.50%,優(yōu)于YF1和YF4單獨(dú)使用的效果,差異顯著;YF1,YF4和BF2兩兩混合使用抑制梨黑斑病,均可顯著抑制梨黑斑病的發(fā)生,發(fā)病率分別為17.5%,10.00%和15
6、.83%,低于單獨(dú)使用一種拮抗菌;CaCl<,2>和低劑量化學(xué)殺菌劑能夠明顯增強(qiáng)拮抗菌的抑菌效果,水楊酸與拮抗菌結(jié)合使用與單獨(dú)使用拮抗菌相比,對(duì)柑橘青霉病和梨黑斑病發(fā)病率的影響不大。4.拮抗菌的生長動(dòng)態(tài):拮抗酵母菌YF1和YF4在有無青霉菌和鏈格孢霉菌作用的情況下都能夠在果實(shí)傷口迅速生長定殖。菌株YF1接種48 h后,數(shù)量增加123.26倍;同時(shí)接種青霉病菌,96 h后YF1的數(shù)量可增加至144.17倍,與鏈格孢霉同時(shí)接種,96 h后Y
7、F1數(shù)量增加至178.29倍;拮抗菌YF4接種72 h后,數(shù)量增加了近200倍,同時(shí)接種青霉病菌,72 h后繁殖數(shù)量是起始值的344.54倍,同時(shí)接種鏈格孢霉,72 h后繁殖數(shù)量是起始值的294.12倍。 5.用1×10<'8> CFU/mL的酵母菌YF1和YF4浸泡柑橘果實(shí)后,柑橘果皮的PAL(苯丙氨酸解氨酶)、POD(過氧化物酶)顯著升高,PPO(多酚氧化酶)顯著降低;在柑橘果實(shí)的傷口處添加青霉(Penicillium it
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