果實(shí)采后病害拮抗菌的分離篩選及其抑菌效果的研究.pdf

1、柑橘青霉病和梨黑斑病是柑橘、梨果實(shí)貯藏期的主要侵染性病害，是造成腐爛損失的重要原因。長期以來，使用化學(xué)殺菌劑一直被認(rèn)為是防治果實(shí)采后病害最有效的方法，但是存在著農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染和病原菌抗藥性等諸多弊端，迫切需要新的安全的保鮮方法來取代化學(xué)殺菌劑的使用。生物防治是選擇對(duì)產(chǎn)品以及人體不造成危害的微生物，利用微生物之間的拮抗作用，抑制病原菌生長的一種有效防治采后病害的新途徑。 本研究旨在分離、篩選能夠抑制果實(shí)采后青霉、鏈格孢霉的拮抗

2、菌株，鑒定其生物學(xué)特性，并測(cè)定所篩選出的菌株YF1，YF4和BF2及不同混配處理對(duì)柑橘青霉病和梨黑斑病的抑制效果，以及在果實(shí)傷口的定殖情況，并對(duì)其保鮮機(jī)理進(jìn)行初步探討。主要結(jié)果如下： 1.拮抗菌的分離和篩選：用稀釋平板法，從果實(shí)傷口、果實(shí)表面、葉片以及果園根際土壤中分離得到102個(gè)菌株。應(yīng)用平板對(duì)峙法，通過初篩和復(fù)篩，離體篩選出10個(gè)菌株對(duì)青霉菌(Penicillium italicum)有拮抗作用，9個(gè)菌株對(duì)鏈格孢霉 (Alt

3、ernaria kilcuchiana)有拮抗作用。進(jìn)一步通過果實(shí)接種法，活體篩選出分別能明顯抑制青霉和鏈格孢霉的拮抗菌YF1，YF2和：BF2，室溫(約25℃)下抑菌率分別為79.12％，62.5％和66.67％。 2.拮抗菌的鑒定：根據(jù)酵母菌的形態(tài)特征、營養(yǎng)特征和生理特性，鑒定拮抗菌YFl為假絲酵母屬(Candida sp)，YF4為檸檬形克勒克酵母(Kloeckera apieulata)。在對(duì)拮抗菌BF2的鑒定中，首先采

4、用細(xì)菌傳統(tǒng)的鑒定方法，對(duì)菌體的表型、生理生化特征進(jìn)行了分類鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BF2符合芽孢桿菌屬細(xì)菌的特征。進(jìn)而采用16S rDNA分子鑒定方法，通過同源性比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育分析，鑒定拮抗菌BF2為芽孢桿菌屬的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)。 3.拮抗菌的抑菌試驗(yàn)：當(dāng)拮抗菌濃度為10<'6>-10<'8>CFU/mL時(shí)，生物防治的效果與拮抗菌的濃度成正相關(guān)；分別在接種1×10<'8> CFU/mL拮抗菌YF1、YF4和

5、BF2的前48 h，24 h，2 h，0 h、后2 h，24 h，48 h接種病菌，同時(shí)和推后病菌接種時(shí)間，都可以維持抑菌效果，但是提前接種病菌拮抗菌的抑菌力會(huì)有所降低。拮抗菌的接種時(shí)間越早防治病害的效果越明顯；YF1與YF4等體積混合用于防治青霉病，果實(shí)發(fā)病率為12.50％，優(yōu)于YF1和YF4單獨(dú)使用的效果，差異顯著;YF1，YF4和BF2兩兩混合使用抑制梨黑斑病，均可顯著抑制梨黑斑病的發(fā)生，發(fā)病率分別為17.5％，10.00％和15

6、.83％，低于單獨(dú)使用一種拮抗菌；CaCl<,2>和低劑量化學(xué)殺菌劑能夠明顯增強(qiáng)拮抗菌的抑菌效果，水楊酸與拮抗菌結(jié)合使用與單獨(dú)使用拮抗菌相比，對(duì)柑橘青霉病和梨黑斑病發(fā)病率的影響不大。4.拮抗菌的生長動(dòng)態(tài)：拮抗酵母菌YF1和YF4在有無青霉菌和鏈格孢霉菌作用的情況下都能夠在果實(shí)傷口迅速生長定殖。菌株YF1接種48 h后，數(shù)量增加123.26倍；同時(shí)接種青霉病菌，96 h后YF1的數(shù)量可增加至144.17倍，與鏈格孢霉同時(shí)接種，96 h后Y

7、F1數(shù)量增加至178.29倍；拮抗菌YF4接種72 h后，數(shù)量增加了近200倍，同時(shí)接種青霉病菌，72 h后繁殖數(shù)量是起始值的344.54倍，同時(shí)接種鏈格孢霉，72 h后繁殖數(shù)量是起始值的294.12倍。 5.用1×10<'8> CFU/mL的酵母菌YF1和YF4浸泡柑橘果實(shí)后，柑橘果皮的PAL(苯丙氨酸解氨酶)、POD(過氧化物酶)顯著升高，PPO(多酚氧化酶)顯著降低；在柑橘果實(shí)的傷口處添加青霉(Penicillium it