Cry1A基因改造及其對玉米的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、玉米螟蟲危害是制約玉米生產(chǎn)的重要因素之一，一般年份可減產(chǎn)10-20％，高發(fā)年份減產(chǎn)30％以上。傳統(tǒng)噴灑農(nóng)藥等殺蟲方法容易使害蟲產(chǎn)生抗藥性，影響農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境和人畜健康。自從1996年美國首次批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米投入商業(yè)生產(chǎn)以來，轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米已成為防治玉米螟蟲危害的重要手段。迄今已有40余種轉(zhuǎn)Bt基因玉米被26個(gè)國家批準(zhǔn)進(jìn)入商業(yè)化種植或飼料食品加工用。目前Bt基因研發(fā)仍在進(jìn)行，并逐步向分離克隆和改造新基因以及構(gòu)建高效表達(dá)載體方向發(fā)展。本文利

2、用密碼子優(yōu)化法改造了Bt基因家族中的Cry1A基因，用In-Fusion法構(gòu)建植物表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌侵染萌動(dòng)胚以及花粉管通道法轉(zhuǎn)化合344等玉米自交系，并對轉(zhuǎn)基因后代植株進(jìn)行分子鑒定和抗蟲鑒定，旨在探索Bt基因修飾改造方法，獲得高效適合于玉米遺傳轉(zhuǎn)化的Bt基因，同時(shí)創(chuàng)制遺傳穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米植株，為抗蟲玉米新品種培育提供新種質(zhì)資源。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)利用密碼子優(yōu)化法對Cry1Ab、Cry1F和Cry1Ac部分功

3、能區(qū)進(jìn)行改造和片段拼接，合成了Bt基因Cry1A.401。
　　 (2)采用In-Fusinon方法構(gòu)建Cry1A.401基因的植物表達(dá)載體pCAMBIA3300-35S-Cry1A.401-bar。
　　 (3)分別采用農(nóng)桿菌侵染萌動(dòng)胚和花粉管通道法，將Cry1A.401基因轉(zhuǎn)入合344等5份玉米自交系，獲得T0代PCR陽性轉(zhuǎn)基因植株402株，其中86株RT-PCR檢測呈陽性。
　　 (4)對轉(zhuǎn)基因T1代植株進(jìn)