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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分大鼠急性壞死性胰腺炎模型的建立及評(píng)估
目的:建立和評(píng)估符合臨床上重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)合并多器官功能障礙(multiple organs dysfunction syndrome,MODS)/多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF)特點(diǎn)的急性壞死性胰腺炎(acute necrotizingpancreatitis,ANP)大鼠模型。
2、
方法:將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組及急性壞死性胰腺炎組(ANP組),每組40只。采用3.6%水合氯醛(10mL/kg)腹腔注射麻醉,逆胰膽管注射5%?;悄懰徕c(1mL/kg)建立ANP模型,分別于術(shù)后12h及24h2個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用腹主動(dòng)脈放血法將大鼠分批處死(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)20只)。整個(gè)過程作以下分析:
1.大鼠一般情況觀察
2.測(cè)定腹水量
3.獲取血清分為二份:全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清淀粉
3、酶(Amylase,AMY)、總膽紅素(Total bilirubin,TBIL)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、血肌酐(Serumcreatine,SCR)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)水平。
4.取胰腺、肝臟及肺臟組織,制作石蠟切片,行HE染色,光鏡下對(duì)其進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分。
結(jié)果:
1.ANP組大鼠腹水量于12h、24h時(shí)間
4、點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯增多(P<0.01)。
2.全自動(dòng)生化儀檢測(cè)AMY、TBIL、ALT、SCR及BUN水平結(jié)果如下:
①ANP組大鼠AMY水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
②ANP組大鼠血清TBIL水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
③ANP組大鼠血清ALT水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)
5、時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
④ANP組大鼠SCR水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
⑤ANP組大鼠血BUN水平于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
3.胰腺、肝臟及肺組織的病理學(xué)變化
①ANP組大鼠有明顯的胰腺損傷,包括組織水腫、廣泛出血、壞死。病理學(xué)評(píng)分于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(
6、P<0.01)。
②ANP組大鼠肝臟組織存在肝細(xì)胞腫脹、變性等變化,肝臟組織病理學(xué)評(píng)分于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
③ANP組大鼠肺臟組織存在肺泡腔明顯滲出、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等變化,肺臟組織病理學(xué)評(píng)分于12h、24h時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯升高(P<0.01)。
結(jié)論:
逆胰膽管注射5%?;悄懰徕c誘導(dǎo)大鼠ANP模型,符合ANP的胰腺病理學(xué)改
7、變,該模型合并肝臟、肺臟等多臟器功能損傷,比較符合人類SAP或SAP合并MODS/MOF臨床表現(xiàn),造模成功率高,且模型相對(duì)穩(wěn)定。
第二部分 LXA4-ME對(duì)大鼠急性壞死性胰腺炎的保護(hù)作用及其可能作用機(jī)制
目的:探討內(nèi)源性抗炎介質(zhì)脂氧素A4(Lipoxin A4,LXA4)類似物(LipoxinA4-methyl ester,LXA4-ME)對(duì)急性壞死性胰腺炎(acute necrotizing pancrea
8、titis,ANP)大鼠的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。
方法:將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(S組)、急性壞死性胰腺炎組(ANP組或M組)及LXA4-ME治療組(LXA4-ME組或T組),每組40只。采用3.6%水合氯(10ml/kg)腹腔注射麻醉,逆胰膽管注射5%?;悄懰徕c(1ml/kg)建立ANP模型。LXA4-ME組在造模后尾靜脈注射含LXA4-ME(87.5ug/kg)的生理鹽水1mL。假手術(shù)組及ANP組造模后經(jīng)尾靜脈
9、注射等量生理鹽水。分別于術(shù)后12h及24h2個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用腹主動(dòng)脈放血法將大鼠分批處死(每組各時(shí)段20只),整個(gè)過程作以下分析:
1.大鼠一般情況觀察
2.獲取血清分為二份:①全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血AMY水平。②ELISA方法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、可溶性E-選擇素(sE-selectin)水平。
3.取胰腺組織,分為四份:①石蠟切片行HE染色,進(jìn)行胰腺組織鏡下病理評(píng)分;②比色法檢測(cè)胰
10、腺組織髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平:⑧運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)胰腺組織中TNF-α、E-selectin、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65 mRNA表達(dá):④應(yīng)用免疫組化技術(shù)(S-P法)檢測(cè)胰腺組織中NF-κB p65蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:
1.ANP組大鼠在造模后表現(xiàn)同
11、第一部分所描述,LXA4-ME組大鼠的一般情況較ANP組有所好轉(zhuǎn),死亡率降低,有顯著差異(P<0.05)。
2.全自動(dòng)生化儀檢測(cè)AMY水平
在造模后12、24小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),ANP組AMY水平明顯升高。LXA4-ME組大鼠12h、24h時(shí)間點(diǎn)血AMY值較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯減小(P<0.05)。
3.ELISA方法檢測(cè)血TNF-α及sE-selectin水平
①在造模后12h、2
12、4h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)血清TNF-α水平較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P<0.05)。
②在造模后12h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)血清sE-selectin水平較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P<0.05)。
4.胰腺組織病理學(xué)評(píng)分
LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)胰腺病理學(xué)評(píng)分?jǐn)?shù)值較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯減小(P<0.05)
13、 5.胰腺組織MPO活性及MDA水平
①在造模后12h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),ANP組大鼠胰腺組織MPO活性較假手術(shù)組明顯增加(P<0.01)。LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)胰腺組織MPO活性較ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯減小(P<0.05)。
②在造模后12h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),ANP組胰腺組織MDA水平較假手術(shù)組MDA水平明顯增加(P<0.01)。LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)胰腺組織MDA水平較
14、ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P<0.05)。
6.胰腺組織TNF-α mRNA、E-selectin mRNA、NF-κB p65 mRNA表達(dá)水平
假手術(shù)組大鼠胰腺組織TNF-α mRNA、E-selectin mRNA、NF-κB p65 mRNA表達(dá)極低,ANP組大鼠中上述指標(biāo)在12h、24h時(shí)間點(diǎn)表達(dá)明顯增多(P<0.01),LXA4-ME組12h、24h時(shí)間點(diǎn)TNF-αmRNA、E-selectin
15、 mRNA、NF-κB p65 mRNA與ANP組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比表達(dá)有所減少(P<0.05)。
7.免疫組化檢測(cè)NF-κB p65蛋白表達(dá)
假手術(shù)組胰腺組織中NF-κB p65蛋白幾乎無(wú)陽(yáng)性表達(dá),ANP組大鼠胰腺組織中可見較多的NF-κB p65蛋白表達(dá)(P<0.01),其在造模后12h、24h時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯差異,LXA4-ME組大鼠胰腺組織NF-κB p65蛋白表達(dá)有所減少,均低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)模型組,有顯著性差
16、異(P<0.05)。
結(jié)論:
1.5%?;悄懰徕c所致ANP大鼠模型中,可以觀察到中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增加,氧自由基水平增加,胰腺組織及血清促炎因子TNF-α及粘附分子E-selectin表達(dá)增加,胰腺組織NF-κB激活。
2.LXA4-ME能夠顯著減輕ANP大鼠胰腺的病理學(xué)損傷,減少腹水量,降低大鼠死亡率,降低血AMY水平。其機(jī)制考慮與LXA4-ME減輕ANP的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、降低氧化應(yīng)激水平、減
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