家蠶質(zhì)多角體病毒入侵、復(fù)制機(jī)理的電子顯微學(xué)研究.pdf

1、現(xiàn)有兩種假說(shuō)：一是病毒僅將其髓核物質(zhì)(即核酸)經(jīng)突起注入到細(xì)胞質(zhì)中，而衣殼留在細(xì)胞表面；二是病毒粒子通過(guò)內(nèi)吞方式進(jìn)入細(xì)胞。以上兩種假說(shuō)均是建立在用體外培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上。為了澄清質(zhì)多角體病毒的入侵方式，本文以家蠶質(zhì)多角體病毒(Bombyxmoricypovirus1，BmCPV-1)為材料，應(yīng)用電子顯微技術(shù)(簡(jiǎn)稱(chēng)電鏡技術(shù))研究了病毒在宿主體內(nèi)的入侵。作者觀察到“BmCPV-1是完整病毒粒子穿膜進(jìn)入中腸細(xì)胞”，這一入侵方式在質(zhì)多角體

2、病毒屬尚屬首次發(fā)現(xiàn)。　　質(zhì)多角體病毒目前尚缺少詳盡的復(fù)制資料。早期研究認(rèn)為病毒核酸是在宿主細(xì)胞核內(nèi)合成，之后運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)去裝配病毒。這一觀點(diǎn)與“呼腸孤病毒的復(fù)制是在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)完成”的論點(diǎn)存在沖突，為了澄清質(zhì)多角體病毒核酸復(fù)制的場(chǎng)所，并定位病毒蛋白在細(xì)胞內(nèi)的合成位點(diǎn)，本文應(yīng)用電鏡原位雜交技術(shù)和免疫電鏡技術(shù)，對(duì)BmCPV-1的核酸和蛋白分別進(jìn)行了追蹤定位研究。用地高辛標(biāo)記的病毒寡核苷酸序列作為探針，應(yīng)用原位雜交技術(shù)，在超微結(jié)構(gòu)水平上，定位病毒

3、核酸復(fù)制中間體——正鏈RNA在細(xì)胞內(nèi)的分布位置。結(jié)果表明親代病毒進(jìn)入核后，在核仁上先合成正鏈RNA，之后運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)完成后期的核酸復(fù)制。此外，作者用BmCPV-1病毒粒子的多克隆抗體對(duì)樣品超薄切片進(jìn)行免疫標(biāo)記，結(jié)果表明病毒蛋白是在病毒發(fā)生基質(zhì)附近的核糖體上合成，運(yùn)到病毒發(fā)生基質(zhì)內(nèi)貯存，并在這里與病毒單鏈正鏈RNA組裝成病毒粒子前體，在病毒粒子前體中合成雙鏈基因組，病毒粒子前體進(jìn)一步組裝最后形成成熟病毒粒子?！　”菊撐南到y(tǒng)研究了BmCPV