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1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶核型多角體病毒多角體單克隆抗體的制備與鑒定姓名：倪愛(ài)民申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王文兵20100607江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTObjectives：Toprepare、screenandidentifythemonoclonalantibodies(McAb)againstBombyxmoriNuclearpolyhedrosisvirus(BmNPV)Polyhedrin
2、(Polh)andtoprovidetheeffectiveantibodiesfortheadvancestudyofBmNPVMethods：Inthestudy，theBmNPVPolyhedrinparticleswerepurifiedbydifferentialcentrifugationThen，BaLb／cmicewereimmunizedwiththepurifiedPolyhedrinparticleswhichwe
3、renotfullyemulsifiedwithFreund’SadjuvantThespleencellsofimmunizedBaLb／cmicewerefusedwithSP2|0cellsusingPEG一4000ThehybridomacellsecretingMcAbagainstBmNPVPolyhedrinwerescreenedbyindirectELISAPositiveclonesweresubclonedbyli
4、miteddilutionandoneclonewerescreenedoutandnamedasD7ThecharacteristicsoftheMcAbwereidentifiedbyChromosomeStabilityAssayofHybridoma，IsotypeIdentificationofMcAb，ELISA，WesternBlottingandSOonResults：Duringfourmonths，thehybird
5、omacellcallstablysecreteMcAbofBmNPVPolyhedrinafterserialpassagesandthreetimesfreezingandrevivalThechromosomeofhybridomacelllinessecretingMcAbWascountedandfoundthatthenumberis99“108，andchromosomesofthemyelomacelllineonlyi
6、stheaverageof55，thisdemonstratethathybridomacelllinesobtainedonthegeneticpointAftersubtypeidentificationofMcAb，displayedD7belongstoIgG2asubclassandkappatypeTheMcAbELISAtitersfromasciteswere1：1061：107westernblottinganalys
7、isshowedthattheMcAbspecificallyreactedwiththepeptidesofBmNPVPolyhedrinTheMcAbshowednoCROSSreactivitytoAcNPVPolyhedrin、ClbiNPVPolyhedrinandEoNPVPolyhedrin，butcrossreactivitytoApNPVPolyhedrinandPCrNPVPolyhedrinAnotheraseri
8、esofrecombinants‘‘BacmidPolyhedrinfragmentEGFP’’havebeensuccessfullyconstructed，layingthefoundationforidentificationoftheepitopesoftheMcAbConclusions：AhybridomacellstrainwhichCansecretemonoclonalantibodyagainstBmNPVPolyh
9、edrinWasgeneratedbyusingcellfusiontechnologyTheMcAbWasdevelopedandit’ScharacteristicsWasidentifiedThepreparationoftheMcAbofBmNPVPolyhedrinCanprovideafoundationforthevirusresearch，abasisfordevelopmentrapiddiagnosticordete
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