FB1膠體金免疫層析試紙條的研制及應用.pdf

1、伏馬菌素是由串珠鐮刀菌（Fusarium moniliforme）所產(chǎn)生的一類水溶性代謝產(chǎn)物，能污染玉米、小麥、水稻等谷類及其制品。伏馬菌素B1（Fumonisin B1，F(xiàn)B1）是串珠鐮刀菌培養(yǎng)物的主要成分，也是導致伏馬菌素毒性作用的主要因素。
　　膠體金免疫層析法是基于單克隆抗體和膠體金材料的基礎上發(fā)展起來的一種側向層析技術，已成為目前真菌毒素檢測的新的研究方向。該檢測方法操作簡便，適應于大量樣本的快速檢測。本試驗采用免疫層析

2、法，研制出FB1檢測用膠體金試紙條，并用于玉米中FB1的快速檢測。
　　將雜交瘤細胞進行擴大培養(yǎng)，注射入小鼠腹腔，收集腹水并進行純化，制備出FB1單克隆抗體，分別通過聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE）和間接酶聯(lián)免疫法（Ci-ELISA）對抗體的純度及效價進行檢測；采用戊二醛一步法對半抗原FB1與卵清蛋白（OVA）偶聯(lián)，制備完全抗原，通過SDS-PAGE和質譜法（MS）對FB1與OVA鑒定偶聯(lián)效果。膠體金溶液的制備采用檸檬酸鈉

3、還原法。試驗對金標抗體、FB1-OVA包被量及羊抗鼠IgG包被濃度進行選擇，并對試紙條的應用性能進行評價。
　　試驗結果如下：
　　1．單克隆抗體濃度為1.3 mg·mL-1，經(jīng)過間接ELISA方法的檢測，可得單抗的效價為1:1024。人工抗原FB1-OVA偶聯(lián)成功，F(xiàn)B1與OVA的偶聯(lián)比為6.2:1，濃度為0.8 mg·mL-1。
　　2．本試驗制備的膠體金溶液粒徑為25 nm、20 nm、15 nm。制備金標抗體最

4、適pH值為7.0，即1 mL膠體金溶液加入15μL0.2 mol·L-1 K2CO3。膠體金與單克隆抗體的最佳結合量為1 mL膠體金溶液加入7μL抗體。膠體金免疫層析試紙條的金標抗體最佳包被量為0.4μg·cm-1，檢測抗原最佳包被量為0.3μg·cm-1，質控線最佳包被濃度為0.10 mg·mL-1。試紙條的靈敏度為2 ng·mL-1，最佳判定濃度為40 ng·mL-1。
　　3.本試驗研制的膠體金免疫層析試紙條與AFB1、DO