溫腎方對(duì)亞臨床甲減大鼠血管損傷的影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察溫腎方對(duì)亞臨床甲減大鼠血管損傷的影響并探討造成這種影響的機(jī)理;
　　 方法:將健康6周齡SPF級(jí)Wistar大鼠50只隨機(jī)抽取8只設(shè)為正常對(duì)照組。而將正常對(duì)照組以外的大鼠行“甲狀腺全切+術(shù)后皮下注射L-T4”法制備亞臨床甲減大鼠模型,造模成功后將這些大鼠隨機(jī)分為模型組,中藥小劑量組,西藥組,中藥大劑量組。然后對(duì)此四組的大鼠行連續(xù)30天的灌胃治療,然后
　　 1.采用化學(xué)發(fā)光法檢測大鼠血清甲功三項(xiàng)的含量,采用El

2、isa法檢測肝臟組織TT3的含量;
　　 2.運(yùn)用東芝DBA-120型全自動(dòng)生化分析儀對(duì)所有實(shí)驗(yàn)大鼠的血脂四項(xiàng)(TC、TG、LDL-C、HDL-C)的濃度進(jìn)行檢測;
　　 3.對(duì)大鼠的肝組織中HMG-CoA還原酶及血清中MCP-1,ET-1的水平采用Elisa法進(jìn)行檢測;
　　 4.取出大鼠胸主動(dòng)脈2cm,勻漿,取其上清液,提取總RNA,利用RT-PCR技術(shù)進(jìn)行基因片段的體外擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物通過電泳后,通過對(duì)其電泳

3、照片上灰度值進(jìn)行檢測,比較其LOX-1mRNA的相對(duì)含量;
　　 5.于灌胃結(jié)束后的第二天在實(shí)驗(yàn)大鼠身上取材,取出大鼠胸主動(dòng)脈標(biāo)本,制備病理標(biāo)本,通過光鏡和電鏡觀察實(shí)驗(yàn)大鼠胸主動(dòng)脈顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu);
　　 結(jié)果:1.與正常組比較,模型組大鼠血清TSH水平明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較,中藥小劑量組TSH水平較明顯降低(p＜0.05);西藥組TSH水平明顯降低(P＜0.05);中藥大劑量組TSH水平明顯降低(p＜

4、0.05)。各組之間FT3,FT4水平無明顯差異(P＞0.05)模型組肝臟訂,含量,與正常組比較,有明顯降低(P＜0.05);中藥大劑量組,中藥小劑量組,西藥組肝臟TT3含量均較模型組明顯提高(P＜0.05),而其中尤以中藥大劑量組的提高最為明顯;
　　 2.中藥大劑量組,與對(duì)照組比較,血漿TC,TG,LDL-C,HDL-C水平?jīng)]有明顯差異(p＞0.05);,與中藥小劑量組比較,血脂四項(xiàng)的水平?jīng)]有明顯差異(P＞0.05);與西藥

5、組比較,沒有明顯差異(P＜0.05);與模型組比較,則TC,TG,LDL-C水平明顯降低(P＜0.05),HDL-C水平明顯提高(P＜0.05)。模型組,與對(duì)照組比較,TC,TG,LDL-C水平明顯升高(P＜0.05),而HDL-C水平明顯降低(P＜0.05);
　　 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理之后,發(fā)現(xiàn)中藥大劑量組,與對(duì)照組比較,肝臟HMG-CR以及血清MCP-1,ET-1的水平?jīng)]有明顯差異(p＞0.05);,與中藥小劑量組比

6、較,肝臟HMG-CR以及血清MCP-1,ET-1的水平?jīng)]有明顯差異(P＞0.05);與西藥組比較,則沒有明顯差異(P＞0.05);與模型組比較,則肝臟HMG-CR以及血清MCP-1,ET-1水平明顯降低,有明顯差異(P＜0.05)。
　　 4.對(duì)空白對(duì)照組,中藥大劑量組,西藥組,中藥小劑量組,模型組的大鼠血管LOX-1的mRNA的RT-PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳后。通過對(duì)其中心區(qū)域的灰度值進(jìn)行掃描分析,然后分別將對(duì)應(yīng)組別自己的LOX-1

7、的mRNA的電泳產(chǎn)物與自己所屬的組別的beta-Actin的mRNA的電泳產(chǎn)物的灰度值進(jìn)行比較,計(jì)算兩者之間數(shù)值的比值。結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較,模型組的LOX-1的mRNA的相對(duì)含量明顯上升(P＜0.05);與模型組的LOX-1的mRNA的相對(duì)含量比較,中藥大劑量組,西藥組,中藥小劑量組的LOX-1的相對(duì)含量均下降明顯(P＜0.05),而特別是以中藥大劑量組的下降最為明顯;
　　 5.顯微結(jié)構(gòu)方面主要表現(xiàn)在動(dòng)脈內(nèi)膜失去光滑狀

8、態(tài),內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷,排列失去正常的秩序,內(nèi)皮細(xì)胞間隙增寬,單核巨噬細(xì)胞的浸潤,泡沫細(xì)胞的形成,平滑肌細(xì)胞的變形,增生;在超微結(jié)構(gòu)層面則表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,結(jié)構(gòu)異常,胞膜失去光滑平整的狀態(tài),細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少,細(xì)胞胞質(zhì)顯清稀,內(nèi)皮細(xì)胞間隙擴(kuò)大,可見單核巨噬細(xì)胞浸潤等異常表現(xiàn);通過中藥小劑量干預(yù)后,大鼠血管病變的程度可見明顯變輕,且隨著溫腎方劑量的提高,亞臨床甲減大鼠血管病變的情形明顯減輕,而且較之西藥治療組而言,還能夠體

9、現(xiàn)出其對(duì)于糾正亞臨床甲減大鼠血管病變的優(yōu)勢。
　　 結(jié)論:采取“甲狀腺全切+每日皮下注射L-T4”這種造模方法可以成功制備SCH模型大鼠。運(yùn)用這種方法制備的SCH模型大鼠,外周組織處于低T3的組織甲減狀態(tài),而肝組織中的HMG-CoA還原酶的含量偏高,由于肝臟高HMG-CoA還原酶水平以及組織低T3狀態(tài)導(dǎo)致SCH模型大鼠的高TC,LDL-C尤其是高OX-LDL水平的血脂紊亂狀態(tài),從而發(fā)生對(duì)于血管內(nèi)皮的脂毒性作用,即對(duì)于血管內(nèi)皮細(xì)胞

10、的直接損傷;而這種損傷引起的ET-1,MCP-1等又反過來加重血管病變,形成較為嚴(yán)重的血管病變;通過溫腎方干預(yù)SCH大鼠后,發(fā)現(xiàn)溫腎方確實(shí)能夠改善實(shí)驗(yàn)大鼠的SCH狀態(tài),提高外周組織T3的利用率,調(diào)整血脂紊亂狀態(tài),尤其是降低OX-LDL的水平,從而緩解對(duì)于血管內(nèi)皮的直接損傷以及由之引起的繼發(fā)性血管病變,這種療效是明顯的,而且相較于西藥組在改善血管內(nèi)皮損傷,減輕血管病變方面,中藥組尤其是中藥大劑量組效果更加突出。這就為在臨床上推廣運(yùn)用溫腎方