溫腎方對亞臨床甲狀腺功能減退大鼠模型心臟損害的防治作用機(jī)理研究.pdf

1、目的:目前對于“是否需要治療亞臨床甲狀腺功能減退,該如何治療?”,仍存在較大爭議。中醫(yī)藥以其獨(dú)特的理論體系應(yīng)用在亞臨床甲狀腺功能減退的臨床治療上取得了一定效果。本課題擬以中醫(yī)古籍理論為基礎(chǔ),結(jié)合導(dǎo)師陳如泉教授的臨證經(jīng)驗(yàn),采用“甲狀腺全切術(shù)+術(shù)后皮下注射L-T4”的方法制備亞臨床甲狀腺功能減退大鼠模型,觀察亞臨床甲狀腺功能減退對心臟結(jié)構(gòu)及功能的影響,探討溫腎方對亞臨床甲狀腺功能減退大鼠模型心臟損害的防治作用及其相關(guān)作用機(jī)制。為中藥治療亞臨

2、床甲狀腺功能減退提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),提出用溫陽補(bǔ)虛法治療亞臨床甲狀腺功能減退的理論。
　　 方法:(1)翻閱古籍經(jīng)典,結(jié)合近現(xiàn)代關(guān)于亞臨床甲狀腺功能減退的臨床觀察及實(shí)驗(yàn)研究成果,從腎陽虛角度立論探討亞臨床甲狀腺功能減退的辨治方法。(2)跟師臨床,總結(jié)導(dǎo)師陳如泉教授辨治亞臨床甲狀腺功能減退的辯證思路及用藥規(guī)律。(3)采用“甲狀腺全切術(shù)+術(shù)后皮下注射L-T4”法制備亞臨床甲狀腺功能減退大鼠模型,設(shè)定空白對照組、模型組、中藥低劑量組、西藥組

3、、中+西藥組及中藥高劑量組,空白對照組和模型組每日灌服蒸餾水5ml/kg,中藥低劑量組每日按中藥低劑量組予以溫腎方藥液,用量為11.25g/kg·d;西藥組予以L-T4片混懸液,用量為4.5μg/kg·d;中+西藥組予以溫腎方藥液(11.25g/kg·d)和小量L-T4混懸液(2.25μg/kg·d);中藥高劑量組予以溫腎方藥液(16.88g/kg·d,即中藥低劑量組的1.5倍)。共灌胃30天。灌胃期大鼠飼料及飲用水,L-T4針劑處理同

4、前。灌胃期間觀察大鼠體重、活動(dòng)、皮色及大便等情況。第31天處死大鼠,處理方法如下:腹主動(dòng)脈取血用化學(xué)發(fā)光法測定血清FT3、FT4及TSH水平,剖胸取心臟組織用ELISA法參照組織T3試劑盒說明測定心肌組織T3水平、甲狀腺激素受體表達(dá)水平、心肌肌球蛋白重鏈基因表達(dá)、心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及細(xì)胞凋亡,觀察心肌組織病理形態(tài)學(xué)變化,同時(shí)觀察溫腎方對其指標(biāo)的干預(yù)情況。
　　 結(jié)果:(1)不論先天稟賦還是后天失調(diào),失治誤治導(dǎo)致的腎陽虧虛均有可

5、能導(dǎo)致亞臨床甲狀腺功能減退的發(fā)生及發(fā)展,提供從腎陽虛角度辨治亞臨床甲狀腺功能減退的理論依據(jù)。
　　 (2)導(dǎo)師陳如泉教授從腎陽虛辨治亞臨床甲狀腺功能減退,運(yùn)用溫陽補(bǔ)腎藥物治療亞臨床甲狀腺功能減退也可取得較好療效。
　　 (3)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與空白對照組比較,各治療組體重均有增加(P＜0.01);與模型組比較,西藥組、中+西藥組及中藥高劑量組體重增加較多,具有顯著意義(P＜0.01);與中藥低劑量組比較,西藥組及中藥高劑量

6、組體重有所增加(P＜0.05),中+西藥組體重變化則具有顯著意義(P＜0.01)。各治療組中FT3及FT4較空白對照組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與模型組比較,各治療組TSH均有所降低,具有顯著意義(P＜0.01),與空白對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (4)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與空白對照組比較,模型組心肌組織T3顯著降低(P＜0.01);與模型組比較,中藥高劑量組心肌組織T3水平顯著升高(P＜0.05);中藥高

7、劑量組心肌組織T3水平接近于空白對照組(P＞0.05)。與空白對照組比較,模型組大鼠心肌組織中甲狀腺激素受體亞型Tα1、Tβ1表達(dá)顯著降低,Tα2表達(dá)顯著增加,(P＜0.01);與模型組比較,中+西藥組大鼠心肌組織中甲狀腺激素受體亞型Tα1、Tβ1。表達(dá)增加(P＜0.05);Tα2表達(dá)降低(P＜0.05);中藥高劑量組在下調(diào)Tα2表達(dá),上調(diào)Tβ1表達(dá)方面有效(P＜0.05);中+西藥組及中藥高劑量組心肌甲狀腺激素受體Tα2、Tβ1表達(dá)水

8、平接近于空白對照組(P＞0.05),中+西藥組在Tα1表達(dá)調(diào)節(jié)上優(yōu)于中藥高劑量組。
　　 (5)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與空白對照組比較,模型組大鼠心肌肌球蛋白重鏈α-MHCmRNA表達(dá)降低(P＜0.05),β-MHCmRNA表達(dá)顯著增加,(P＜0.01);與模型組比較,中+西藥組和中藥高劑量組在上調(diào)大鼠心肌α-MHCmRNA表達(dá),下調(diào)大鼠心肌β-MHCmRNA表達(dá)方面效果明顯(P＜0.05);中+西藥組及中藥高劑量組心肌α-MHCmRN

9、A、β-MHCmRNA表達(dá)水平接近于空白對照組(P＞0.05)。
　　 (6)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與空白對照組比較,模型組大鼠心肌羥脯氨酸、膠原蛋白含量降低(P＜0.01);與模型組比較,西藥組、中+西藥組和中藥高劑量組心肌羥脯氨酸、膠原蛋白含量明顯增高(P＜0.01);中藥高劑量組心肌羥脯氨酸及膠原蛋白水平接近于空白對照組(P＞0.05)。大鼠心肌組織在×400放大后,HE染色后顯示空白對照組心肌細(xì)胞排列整齊,橫紋清楚。與空白對照組

10、相比較模型組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂,部分細(xì)胞腫脹明顯;中藥低劑量組大鼠心肌細(xì)胞病理變化介于二者之間,可見少量腫脹肌細(xì)胞;西藥組、中+西藥組及中藥高劑量組大鼠心肌病理變化接近空白對照組?？瞻讓φ战M大鼠心肌組織在透射電鏡下可見細(xì)胞核未見明顯改變,胞質(zhì)中膠原纖維排列良好,肌節(jié)中各帶明顯,線粒體不腫脹,肌質(zhì)網(wǎng)不擴(kuò)張;模型組大鼠心肌組織中心肌細(xì)胞核不規(guī)則,染色質(zhì)邊集,胞質(zhì)中線粒體明顯腫脹,線粒體嵴損傷、斷裂,形成不規(guī)則的增大的間隙,線粒體基質(zhì)溶解,

11、肌質(zhì)網(wǎng)腫脹,可見肌節(jié),但肌節(jié)中各帶不明顯;中藥低劑量組大鼠心肌組織中細(xì)胞核輕度不規(guī)則收縮,核周間隙增大,細(xì)胞質(zhì)中肌原纖維未見明顯改變,部分線粒體輕度腫脹,嵴間隙增寬,糖原減少或消失,肌質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張;西藥組、中+西藥組及中藥高劑量組大鼠心肌組織中細(xì)胞核不規(guī)則,核周間隙局部增大。胞質(zhì)中肌原纖維排列良好,肌節(jié)尚明顯,肌節(jié)中各帶不明顯,線粒體不腫脹,肌質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張。
　　 (7)與空白對照組比較,模型組心肌細(xì)胞Ca2+濃度顯著升高(P＜

12、0.01);與模型組比較,中藥高劑量組心肌細(xì)胞Ca2+濃度降低(P＜0.05);中藥高劑量組心肌細(xì)胞Ca2+濃度接近于空白對照組(P＞0.05)。大鼠心肌組織切片,染色標(biāo)記后在×400放大后,模型組可見棕黃色細(xì)胞核明顯增多,空白對照組偶見,中藥低劑量組及西藥組顆粒低、中+西藥組及中藥高劑量組均較少。
　　 結(jié)論:腎陽虛是亞臨床甲狀腺功能減退的病理基礎(chǔ),因此應(yīng)用溫陽補(bǔ)腎藥物能夠治療亞臨床甲狀腺功能減退。從導(dǎo)師陳如泉教授臨床辨治亞臨

13、床甲狀腺功能減退角度進(jìn)一步證實(shí)溫陽補(bǔ)腎藥物能夠治療亞臨床甲狀腺功能減退。實(shí)驗(yàn)研究證明亞臨床甲狀腺功能減退引起心肌組織T3水平的降低和甲狀腺激素受體基因的異常表達(dá),影響心肌肌球蛋白重鏈基因表達(dá),改變心肌組織膠原含量及心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,從而影響心肌組織結(jié)構(gòu)及舒縮功能。溫腎方能夠在一定程度上逆轉(zhuǎn)這些變化,在治療亞臨床甲狀腺功能減退的基礎(chǔ)上溫腎方能能顯著改善亞臨床甲狀腺功能減退模型大鼠的體重、活動(dòng)等一般狀況,還能在不升高血清FT1及FT4的