甲減大鼠腎臟損傷及發(fā)病機理的實驗研究.pdf

1、目的：甲狀腺功能減退癥(簡稱甲減)，是一種較為常見的內(nèi)分泌疾病。甲狀腺激素(TH)的分泌減少，可影響機體各系統(tǒng)。關于甲減導致的皮膚、心臟、血管、神經(jīng)肌肉等損傷的研究較多，而甲減相關性腎病報道甚少。TH減少可引起腎臟結構和功能的改變，確切機制尚不清楚，可能與甲減的低代謝狀態(tài)、高脂血癥、氧化應激等因素引起腎臟形態(tài)學改變，進而影響其功能有關。 TH對腎臟的影響已成為目前研究的焦點問題。對甲減腎損傷及其發(fā)生機制進行系統(tǒng)的研究，可為甲減腎

2、損傷的防治提供理論依據(jù)。本實驗觀察了：1甲減大鼠腎臟的形態(tài)學改變，并對其進行定量分析。2甲減大鼠腎臟代表抗氧化能力的酶：谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)的組織學水平，以及過氧化損傷致組織中丙二醛(MDA)含量及腎臟細胞膜ATP酶活性的變化。3甲減大鼠腎臟Na+，K<'+>ATP酶αl亞基mRNA的基因表達水平。 方法：本研究在成功復制甲減動物模型的基礎上，利用生物化學、形態(tài)定量學、分子生物學等方法，系統(tǒng)觀察

3、了甲減大鼠腎臟組織形態(tài)學改變和過氧化損傷的相關酶學變化。 本研究共分五部分： 1、甲減動物模型的復制：選用健康斷乳一個月、體重在80-100g的Wistar大鼠，雌雄各半，隨機分為甲功正常組即對照組(EU)和甲減組(HYPO)，每組10只。二組均食用低碘地區(qū)糧食配制的飼料，含碘量42ug/kg。EU組飲用含碘化鉀0.3ug/ml的去離子水，HYPO組飲用含碘化鉀0.0ug/ml的去離子水。飼養(yǎng)24周。 2、血清

4、學測定：分別留取兩組動物的不抗凝全血4ml，離心，吸取血清約2ml，利用競爭結合放射免疫分析方法測定血清TT3、TT4、FT3、FT4的水平。 3、甲減大鼠腎臟形態(tài)學改變：以模型為基礎，對EU組及HYPO組大鼠腎臟組織切片，分別進行HE、：PAS、PASM染色。用VIDSⅢ型半自動圖像分析儀測定平均腎小球面積和體積，用TJTY-300型醫(yī)用圖像處理系統(tǒng)測腎小球一定面積(3100.94 μm<'2>)內(nèi)PAS陽性物質積分光密度(I

5、LD)。并于光鏡下觀察腎臟的形態(tài)學改變。 4、甲減大鼠腎臟氧化損傷相關酶學的組織水平測定：上述大鼠飼養(yǎng)24周，取腎臟組織勻漿，利用生物化學的方法分別測定腎臟組織中GPx、SOD、Na<'+>，K<'+>-ATP酶、Mg<'2+>-ATP酶、Ca<'2+>-ATP酶、Ca<'2+>，Mg<'2+>-ATP酶的活性及過氧化產(chǎn)物MDA的含量。 5、甲減大鼠腎臟Na<'+>，K<'+>-ATP酶α<,1>亞基的基因表達：取-80

6、℃保存的新鮮腎臟皮質，利用Trizol一步法提取總RNA，再逆轉成cDNA，應用RT-PCR的方法擴增目的基因Na<'+>，K<'+>-ATP酶α1亞基，利用管家基因GAPDH作為內(nèi)參照，1％瓊脂糖凝膠電泳后應用MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)進行灰度測量，結果取目的基因與內(nèi)參照的比值進行半定量分析。 結果： 1、與EU組比較，HYPO組TT3、TT4、FT3、FT4均明顯下降(P<0.01)。 2、與EU組比較，

7、HYPO組大鼠體重及腎重明顯減輕(P<0.05)；腎小球、腎小管基底膜增厚；腎小球系膜基質增多、系膜區(qū)擴大；腎小球平均面積和平均體積著降低(P<0.05)；腎小球內(nèi)代表系膜基質含量的PAS陽性物質積分光密度(ILD)值顯著增高(P<0.01)。 3、與EU組比較，HYPO組大鼠腎臟組織中GPx活性顯著升高(P<0.01)，SOD、Na<'+>，K<'+>-ATP酶、Mg<'2+>-ATP酶、Ca<'2+>-ATP酶、Ca<'2+

8、>，Mg<'2+>-ATP酶活性顯著下降(P<0.01)，MDA含量顯著增加(P<0.05)。 4、與EU組比較，HYPO組大鼠腎臟組織中，Na<'+>，K<'+>-ATP酶α1亞基的基因表達水平明顯下降(P<0.05)。 結論： 1、同一種動物通過食用含碘量很低的飼料及飲用水，可導致甲減，故低碘飲食使甲減動物模型復制成功。 2、甲減可致大鼠腎臟重量降低，腎小球面積、體積減小。腎小球、腎小管基底膜增厚、腎

9、小球系膜基質增多，系膜區(qū)擴大。 3、甲減大鼠腎臟GPx酶活性代償性升高，SOD酶活性下降，Na<'+>，K<'+>-ATP酶、Mg<'2+>-ATP酶、Ca<'2+>-ATP酶、ca<'2+>，Mg<'2+>-ATP酶活性下降，過氧化產(chǎn)物MDA含量升高。提示在甲減大鼠腎臟中，盡管GPx升高以抵消過多的自由基，但SOD的下降超過GPx代償性的升高作用，導致過氧化產(chǎn)物MDA升高，同時致腎臟組織細胞膜Na<'+>，K<'+>-ATP酶