豬GBP1、GBP2基因的分子特征與功能初步研究.pdf

1、疾病的預防與控制是現代養(yǎng)豬生產的關鍵問題,因而發(fā)掘疾病抵抗候選基因并應用于抗病育種的實踐越來越重要。前期通過感染沙門氏菌豬肺臟的轉錄組研究我們篩選出許多差異表達基因,其中包括干擾素誘導的鳥苷酸結合蛋白(interferoninducible guanylate bindins proteins,GBPs)家族的GBP1和GBP2。研究表明,GBPs類似于Mx蛋白(myxovirus)都屬于干擾素誘導的GTP酶大家族,他們對生物體抵抗細胞

2、內病原微生物感染起著重要作用。因此,我們以豬的GBP1和GBP2基原因研究對象進行了基因克隆,染色體定位,亞細胞定位,與免疫性狀的關聯分析和感染實驗等相關研究。主要的研究結果如下:
　　 1.克隆了豬GBP1和GBP2基因3003bp和2237bp長的cDNA序列并分析了基因組結構,發(fā)現兩個基因都包含11個外顯子。推導的氨基酸序列分析顯示這兩個基因都包含經典的GTP結合基序,并且C末端具有蛋白質異戊二烯化修飾的CAAX基序。

3、r>　　 2.利用體細胞和輻射雜種板將GBP1和GBP2分別定位于SSC4q21-q23和SSC4q24,都和SWR153標記緊密連鎖。
　　 3.RT-PCR方法分析組織表達發(fā)現GBP1和GBP2基因都在成年通城豬的脾臟具有很高的表達水平,轉染融合表達質粒的亞細胞定位結果顯示GBP1和GBP2均在細胞質中表達。GBP1和GBP2基因在RNA水平上有著十分相似的表達模式。Poly(I:C)刺激PK15細胞的實驗顯示兩個基因在刺

4、激6小時后開始上調,6小時到12小時表達量迅速增加,在約24小時后達到表達的頂峰,隨后在24到48小時開始回落。克隆了兩個基因5’調控區(qū)的序列,轉錄因子預測結果表明ISRE和GAS順式作用元件可能在調控GBP1和GBP2基因表達中起關鍵作用。
　　 4.在兩個基因中分別發(fā)現T4個和3個SNP位點,并對其中兩個改變氨基酸的SNP位點進行了免疫性狀的關聯分析,中外豬種的基因型頻率分析。關聯分析結果顯示GBP1的Eco81I多態(tài)位點和