豬傳染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究.pdf

1、豬乙型肝炎病毒（Hepatitis B liked Virus of swine，swHBV）和豬戊型肝炎病毒（SwineHepatitis E Virus，sw HEV）是當(dāng)今影響人和動(dòng)物健康的兩種重大人畜共患傳染病，兩病的廣泛流行和蔓延已給人類和動(dòng)物的健康造成了嚴(yán)重威脅。在現(xiàn)代化規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)中，HBV與HEV往往混合感染，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。為了了解這兩種病原在豬群中的感染狀況及病原特征，本實(shí)驗(yàn)以HBV和HEV當(dāng)?shù)亓餍卸局隇檠芯坎牧?，進(jìn)

2、行了流行病學(xué)調(diào)查、基因克隆、基因圖譜繪制、分子結(jié)構(gòu)特征分析、分子診斷及免疫研究，主要研究成果如下：
　　 1.應(yīng)用ELISA技術(shù)，對(duì)蘭州及周邊地區(qū)的屠宰場(chǎng)、養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)豬采集血樣976份，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，并對(duì)豬HBV進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果如下：
　　 （1）豬類乙肝的各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果顯示，豬群中類乙肝陽(yáng)性率較高，其中大三陽(yáng)和小三陽(yáng)率總體占到1.5％，病毒發(fā)現(xiàn)復(fù)制（e抗原）的豬占5.9％；產(chǎn)生抗體（表面抗體）的豬達(dá)16％。
　

3、　 （2）在甘肅的靖遠(yuǎn)和景泰地區(qū)豬類乙肝的陽(yáng)性率比較高，分別達(dá)到25.7％和20.5％。
　　 （3）八月齡以上的豬與八月齡以下的豬相比，類乙肝陽(yáng)性率偏高，分別為14.6％和
　　 4.5％。
　　 （4）泔水豬比集約化豬場(chǎng)豬乙類肝陽(yáng)性率高，分別為23.2％和5.9％。
　　 2.分段克隆了swHBV的S、C、P基因片段，繪制基因圖譜和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果表明，擴(kuò)增的swHBV-S基因長(zhǎng)251bp，與國(guó)內(nèi)外

4、參考毒株CHN-QH5、Tibet127等12個(gè)毒株核苷酸序列的同源性分別為99.0％～99.6％，其中與CHN-QH38株遺傳距離較近；擴(kuò)增的swHBV-C基因長(zhǎng)550bp，與國(guó)內(nèi)外參考毒株SK300、NSS-2等12個(gè)毒株核苷酸序列的同源性分別為99.0％～99.8％，其中與CHN-L45株遺傳距離關(guān)系較近；擴(kuò)增的swHBV-P基因長(zhǎng)1414bp，與國(guó)內(nèi)外參考毒株G683-1、S245-A2等10個(gè)毒株核苷酸序列的同源性分別為94.

5、8％～95.8％，其中與S245-A2株遺傳距離較近；
　　 3.采集甘肅、青海部分地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)的豬糞便和膽汁556頭份，進(jìn)行了豬戊型肝炎病毒（swHEV）的RT-PCR檢測(cè)，糞便和膽汁中豬戊型肝炎陽(yáng)性率高達(dá)4.2％和10.7％。
　　 4.設(shè)計(jì)7對(duì)巢氏PCR引物，利用RT-RCR技術(shù)，分段克隆了涵蓋swCH146株基因組的cDNA片段，并對(duì)swHEV146株全基因特征進(jìn)行了分析，繪制了swCH146株全基因圖譜和系統(tǒng)進(jìn)化

6、樹(shù)，結(jié)果表明，該毒株全基因組長(zhǎng)7284bp，與HEVG-4（AJ272108.1）和swCH25（AY594199.1）兩株病毒親緣關(guān)系最近，同屬于HEV基因Ⅳ型，其中與新疆swCH25株同源性最高，達(dá)到89.5％。
　　 對(duì)swCH146株各基因的核苷酸同源性進(jìn)行分析顯示，swCH146株包含3個(gè)閱讀框（ORF1、ORF2、ORF3），swHEV146株ORF1與己報(bào)道的HEVⅠ型株（D11093）、Ⅱ型mexican str

7、ain株（M74506.1）和Ⅲ型SWKOR-2株（FJ426404）的ORF1核苷酸同源性分別為87.5％、83.2％和91.0％，而與Ⅳ型KNIH-hHEV4株（FJ763142.1）的同源性高達(dá)97.2％；swHEV146株ORF2與以上Ⅰ～Ⅲ型毒株的核苷酸同源性分別為92.6％、92.4％和94.9％，與Ⅳ型KNIH-hHEV4株同源性為98.9％；swHEV146株ORF3與以上Ⅰ～Ⅲ型毒株的核苷酸同源性分別為87.5％、90