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文檔簡介
1、分類號:密級:學校代碼:10414學號:2013010794碩士研究生學位論文三角帆蚌免疫相關基因三角帆蚌免疫相關基因HSP70、TNFAIP8、GBP1及TLR2的克隆與表達分析的克隆與表達分析CloningexpressionanalysisofimmunerelatedgenesHSP70、TNFAIP8、GBP1TLR2fromHyriopsiscumingii吳圣楠吳圣楠院所:生命科學學院導師姓名:劉毅副教授學科專業(yè):生物化學
2、與分子生物學研究方向:分子免疫學二○一六年五月I摘要三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)是我國特有的淡水良種育珠貝,易受病害威脅而遭受重大經濟損失,開展三角帆蚌免疫相關基因研究具有十分重要的現實意義。本研究采用RACE技術,對高通量轉錄組測序所獲得的三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)熱休克蛋白70(HSP70)、腫瘤壞死因子α誘導蛋白8(TNFAIP8)、干擾素誘導的鳥苷酸結合蛋白1(GBP1)與Toll樣受體2(
3、TLR2)基因的長片段進行擴增,拼接得到這四種免疫相關基因的cDNA序列全長,采用熒光定量PCR(qRTPCR)技術研究了HcHSP70和HcTNFAIP8基因在各組織中的表達分布情況及其應激表達情況,并采用Westernblot技術從蛋白質水平研究溫度刺激對HcHSP70表達的影響。HcHSP70基因cDNA序列全長2298bp,開放閱讀框為1974bp,編碼657個氨基酸,預測蛋白分子量大小為71.6kDa。含有三個HSP70家族典
4、型的標簽序列,末端保守區(qū)域EEVD以及典型的重復位點GGXP。與其他物種HSP70同源性很高,最高達91%,通過構建系統進化樹發(fā)現HcHSP70與其它4種軟體動物HSP70聚為一支。HcHSP70在肝胰腺中表達量最高,其次是性腺,而在鰓、外套膜及肌肉中的表達量較低。實時熒光定量PCR和Westernblot技術顯示,鰓組織中HcHSP70mRNA和蛋白的表達量隨水溫上升而上調,37℃時表達量顯著上升到最高值,而40℃時表達量恢復至正常水
5、平。HcTNFAIP8基因cDNA序列全長1179bp,開放閱讀框為573bp,編碼190個氨基酸,預測分子量大小為23.64kDa。HcTNFAIP8與長牡蠣CgTNFAIP8相似性最高為71%,且在系統進化樹的同一個分支上。實時熒光定量PCR結果顯示:HcTNFAIP8在性腺中表達量最高,其次為肝胰腺,而在鰓、外套膜及心臟中表達量較低;HcTNFAIP8的表達并不受PGN的誘導影響,而在LPS刺激后,HcTNFAIP8表達量出現先顯
6、著下調再上調情況,最終恢復接近到正常值。HcGBP1基因cDNA全長為2418bp,開放閱讀框為1947bp,編碼648個氨基酸,預測分子量大小為76.28kDa。同源序列比對發(fā)現HcGBP1與非洲爪蟾GBP1處于同一個大分支中;HcTLR2基因cDNA序列全長1177bp開放閱讀框為1032bp,編碼343個氨基酸,預測分子量大小為39.58kDa,同源序列比對發(fā)現發(fā)現三角帆蚌與馬氏珠母貝聚為一支。關鍵詞:關鍵詞:三角帆蚌;熱休克蛋白
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