大鼠骨骼肌挫傷后ASCT2 mRNA時序性表達研究.pdf

1、目的:
　　 應用實時定量PCR技術檢測大鼠骨骼肌挫傷后細胞內(nèi)ASCT2 mRNA表達，分析其與挫傷的時間關系，旨為法醫(yī)學早期損傷時間的推斷探尋新的思路。
　　 方法:
　　 (1)選取成年雄性Sprague-Dawley大鼠96只，并且將其隨機分成3組，包括:生前損傷組(72只)、正常對照組（6只）、死后損傷組（18只）。生前損傷組動物經(jīng)麻醉、固定于鼠板和褪毛后，將重力錘自由落下打擊右后肢大腿內(nèi)側(cè)肌群致骨骼肌挫

2、傷，分別于傷后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小時迅速頸椎脫臼處死，并取材。在生前損傷12、24、36小時組動物左后肢大腿內(nèi)側(cè)骨骼肌取材，以比較正常肌肉和損傷肌肉之間ASCT2 mRNA表達水平。死后損傷組動物按照處死并打擊致挫傷之后的時間間隔不同，分別6、12、18小時三個時間點取材。正常對照組動物未經(jīng)打擊，直接頸椎脫臼處死;(2)使用Invitrogen TRIzol Reagent試劑盒提取肌肉組

3、織中總RNA，并且使用紫外分光光度計對總RNA純度進行檢驗，并根據(jù)紫外分光光度計所測得OD260/OD280的比值來評價核酸純度;(3)將RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再以cDNA為模板、RPL13為內(nèi)參基因進行Real-time PCR，采用2^-△△CT法比較其與正常肌肉組織中ASCT2 mRNA的相對表達量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)根據(jù)紫外分光光度計所測得結(jié)果提示:總RNA完整性較理想，符合后續(xù)實驗的要求;(2)目

4、的基因與內(nèi)參基因的擴增效率分別為89.5％和90.1％，相關系數(shù)均大于理想值0.98，表明直線性較好，定量準確，擴增效率較高且較為一致，表明RPL13作為ASCT2 mRNA的內(nèi)參基因較為合適;(3)損傷組肌肉組織中ASCT2 mRNA在挫傷后12、16、36、40小時表達量分別為正常組的196.40％、189.15％、182.54％和136.65％，損傷后4、8、20、24、28、32、44、48小時ASCT2 mRNA表達量與正常組

5、相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，說明ASCT2 mRNA在損傷12至16小時其表達量迎來第一個高峰，隨后又降至正常水平，而到了損傷后36至40小時表達量又迎來第二個高峰，之后回落并趨于穩(wěn)定;(4)生前損傷組正常肌肉ASCT2 mRNA的表達相對于正常對照組，二者并無差異(P＞0.05);(5)正常對照組與死后損傷組的各個時間點之間的ASCT2mRNA表達量并不存在差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 (1) AS