外泌體中CD82作為早期診斷乳腺癌的生物標(biāo)志物研究.pdf

1、2018年國家癌癥統(tǒng)計(jì)中心公布的數(shù)據(jù)顯示，乳腺癌已經(jīng)超過肺癌成為女性發(fā)病率最高的癌癥。在中國，每年乳腺癌新發(fā)病例大約為27萬，專家指出早診斷早治療，其治愈率可達(dá)90％以上，但由于診斷方法的滯后性，大多數(shù)患者診斷時(shí)已經(jīng)錯(cuò)過最佳治療期，以北京為例，首診為Ⅰ期的患者比例只占32％。目前診斷乳腺癌主要依靠彩超、CT、細(xì)針穿刺等，但這些方法均具有不能早期篩查或有創(chuàng)等缺點(diǎn)，所以積極尋找新的早期診斷乳腺癌的標(biāo)志物迫在眉睫。
　　外泌體是直徑在3

2、0-150nm之間的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)的微小囊泡，大多數(shù)細(xì)胞在生理或病理狀態(tài)下均分泌外泌體，外泌體廣泛分布于人體體液中，包括外周血、唾液、尿液及羊水等。外泌體中包含豐富的蛋白質(zhì)及遺傳物質(zhì)，可被運(yùn)輸?shù)桨薪M織或靶器官行使其功能。CD82屬于四跨膜蛋白超家族成員，是廣譜的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子，其在正常組織中高表達(dá)而其表達(dá)降低或缺失，與腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展有關(guān)。
　　目的：
　　在健康人、乳腺良性疾病及乳腺癌患者中，分別比較血清及血漿外泌體中

3、CD82表達(dá)的差異，以及組織切片中CD82表達(dá)量的差異，分析組織切片CD82表達(dá)量與外泌體中CD82含量之間的相關(guān)性，研究外泌體中CD82在乳腺癌早期診斷及預(yù)后評估中的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：
　　研究對象240例，其中80例惡性乳腺癌、80例乳腺良性疾病及80例年齡匹配的健康人外周血作為對照，采用沉淀法快速提取血清和血漿中的外泌體;Nanosight方法檢測外泌體濃度及粒徑分布;ELISA及Western Blot檢測外泌體

4、標(biāo)志性蛋白CD9及CD63的表達(dá);ELISA檢測外泌體CD82的表達(dá)：Western Blot檢測外泌體中CD82及全血和血清中CD82的表達(dá);Image Studio Ver4.0軟件計(jì)算蛋白條帶的積分光密度值;免疫組化檢測組織切片中CD82的表達(dá)量;Imagepro-plus6.0軟件分析平均光密度量化組織中CD82表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.Nanosight方法檢測外周血提取的外泌體，能夠檢測到直徑為30-150n

5、m的微囊泡，且ELISA及Western Blot均能夠檢測到外泌體標(biāo)記蛋白CD9、CD63的表達(dá)。
　　2.與良性乳腺疾病患者及健康體檢者相比，乳腺癌患者血清及血漿外泌體中CD82表達(dá)量明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.外泌體中CD82表達(dá)量明顯高于外周全血及血清中其含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.與良性乳腺疾病組織及癌旁正常乳腺組織相比，乳腺癌組織CD82表達(dá)量明顯降低，差異有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.組織中CD82表達(dá)量與外泌體中CD82含量有顯著相關(guān)性(r2=0.7329，P=0.0019)。
　　結(jié)論：
　　1.采用SBI外泌體提取試劑盒能夠從外周血中成功提取形態(tài)完整的外泌體。
　　2.乳腺癌患者血清外泌體CD82含量明顯高于健康人及乳腺良性疾病患者，并且隨著乳腺癌分期的增高，其含量明顯升高。
　　3.外泌體中CD82含量明顯高于血清及全血中CD82的含量，說明