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文檔簡(jiǎn)介
1、目的
通過(guò)白介素2(IL-2)聯(lián)合地塞米松預(yù)處理上調(diào)體內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg),治療小鼠的氣道過(guò)敏性炎癥性疾病。
通過(guò)地塞米松預(yù)處理,foxo3a siRNA沉默基因后測(cè)定淋巴細(xì)胞凋亡率,觀察Foxo3a是否在地塞米松誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞凋亡中占有重要地位。
研究IL-2聯(lián)合地塞米松上調(diào)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的機(jī)理。
方法
a)建立小鼠的氣道過(guò)敏性炎癥性疾病模型,并根據(jù)肺泡灌洗液細(xì)
2、胞數(shù)、細(xì)胞因子水平、肺臟病理檢測(cè)模型是否成功建立。
b)不同劑量的IL-2聯(lián)合地塞米松注射小鼠,后利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)經(jīng)過(guò)這種處理后小鼠脾細(xì)胞中Treg的變化,并觀察此種治療可以維持Treg變化的時(shí)間。
c)IL-2聯(lián)合地塞米松處理小鼠后,進(jìn)行氣道過(guò)敏性炎癥性疾病小鼠模型的造模。并檢測(cè)經(jīng)過(guò)此種預(yù)處理后肺泡灌洗液細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞因子水平、肺臟病理的變化。
d)相應(yīng)濃度的地塞米松預(yù)處理淋巴細(xì)胞懸液,在規(guī)定
3、的時(shí)間收取細(xì)胞利用western blot檢測(cè)FoxO3a與磷酸化FoxO3a變化情況,而后使用foxo3asiRNA轉(zhuǎn)染,沉默F(xiàn)oxO3a基因后,觀察地塞米松誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞凋亡率的變化,并觀察比較地塞米松敏感與耐藥細(xì)胞株對(duì)地塞米松的反應(yīng)及FoxO3a和磷酸化FoxO3a表達(dá)情況。
e)利用磁珠分選出CD4+CD25+細(xì)胞和CD4+CD25+細(xì)胞,觀察這兩種細(xì)胞在不同濃度的IL-2存在條件下,對(duì)地塞米松誘導(dǎo)的凋亡的反應(yīng)(檢
4、測(cè)凋亡率的變化)。并通過(guò)western blot分析不同濃度的IL-2存在條件下,地塞米松處理后兩種細(xì)胞中FoxO3a、磷酸化.FoxO3a、Bim的變化。
f)利用Akt-IV抑制劑后,觀察磷酸化FoxO3a,的變化。并觀察使用Akt-IV
g)抑制劑后,相應(yīng)濃度的IL-2,地塞米松處理后兩種細(xì)胞凋亡率的變化和FoxO3a、磷酸化FoxO3a和Bim的變化。
結(jié)果
1.對(duì)BaIB
5、/C小鼠致敏和激發(fā)后,發(fā)現(xiàn)小鼠支氣管肺泡灌洗液中總細(xì)胞數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)增加,IL-4、IL-5量增加,而IFN-Y量減少。小鼠氣道過(guò)敏性炎癥性疾病模型造模成功。
2.IL-2聯(lián)合地塞米松可以上調(diào)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,比較適當(dāng)?shù)膭┝繛镮L-2400000IU每只小鼠,地塞米松的劑量為0.1ing每只小鼠。
3.IL-2聯(lián)合地塞米松處理后,發(fā)現(xiàn)再次建模小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞數(shù),嗜酸性粒細(xì)胞數(shù),IL-4、IL-5明顯減少,
6、IFN-γ升高。
4.地塞米松的劑量增加,小鼠脾淋巴細(xì)胞凋亡率增加,淋巴細(xì)胞中總FoxO3a增加,磷酸化的FoxO3a卻降低。經(jīng)過(guò)沉默基因FoxO3a后,地塞米松誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞凋亡率下降。
5.對(duì)地塞米松敏感的腫瘤細(xì)胞株受到地塞米松作用后,總FoxO3a升高,磷酸化FoxO3a減少,而對(duì)地塞米松耐藥的腫瘤細(xì)胞株在接受地塞米松處理前后變化不大。
6.CD25+Treg相比CD25-Teff細(xì)胞,在
7、合適量IL-2存在下,地塞米松處理后,磷酸化FoxO3a表達(dá)更高,凋亡相對(duì)減少。
7.Akt抑制劑使用后,Treg和Teff中磷酸化FoxO3a表達(dá)均受到抑制,此時(shí)無(wú)論如何改變IL-2的量?jī)煞N細(xì)胞的凋亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)論
1.IL-2聯(lián)合地塞米松可以預(yù)防小鼠氣道過(guò)敏性炎癥性疾病的發(fā)生。
2.IL-2聯(lián)合地塞米松可以上調(diào)體內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例。
3.有活性的FoxO
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