BCG復(fù)方組分對過敏性哮喘小鼠氣道炎癥和氣道反應(yīng)性的影響.pdf

1、流行病學(xué)調(diào)查顯示卡介苗接種可以減少變應(yīng)性疾病的發(fā)生。動物實驗驗證了完整的卡介苗（bacille calmete-guerin，BCG）對哮喘氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性具有抑制作用，本所前期研究亦證明了早期低劑量的BCG組分核酸（DNA）和多糖（polysaccharide，PSA）均能顯著抑制哮喘模型小鼠氣道炎癥和氣道反應(yīng)性，但二者在BCG對哮喘的干預(yù)作用中誰占主要地位，BCG復(fù)方組分的最適比例及其作用機制探討有待進一步明確。目前哮喘模型建

2、立的方法各異，本實驗首先建立穩(wěn)定的哮喘模型，觀察不同激發(fā)方式對小鼠過敏性哮喘模型的影響。在此基礎(chǔ)上，研究BCG-DNA及BCG-PSA不同復(fù)方比例對小鼠哮喘模型氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性（airway hyperresponsiveness，AHR）的影響，探討B(tài)CG組分最適復(fù)方配比。 第一部分：不同激發(fā)方式對過敏性哮喘小鼠模型的影響 目的：探討不同激發(fā)方式對過敏性哮喘小鼠模型的影響。 方法：哮喘模型組采用卵蛋白（O

3、VA）致敏和激發(fā)BalB/c小鼠，第0、7、14d腹腔注射20μgOVA+150μl Al（OH）3+50μlNS（100μg/ml）混懸液致敏，從第28d開始分別給予不同次數(shù)和方式的激發(fā)。根據(jù)激發(fā)方式的不同，分別采用1%OVA溶液霧化和50μl激發(fā)液（2mg/mlOVA-NS溶液）滴鼻，隨機分為5組，包括三次滴鼻激發(fā)組（In.3d）、兩次霧化20min激發(fā)組（Ae.2d-20）、三次霧化20min激發(fā)組（Ae.3d-20）、三次霧化3

4、0min激發(fā)組（Ae.3d-30）、四次霧化20min激發(fā)組（Ae.4d-20），每組12只。各組激發(fā)后48h采用整體體積描記法檢測小鼠氣道反應(yīng)性。觀察300μl倍增濃度的乙酰甲膽堿（Mch）霧化激發(fā)后增強的呼氣間歇（enhanced pause，Penh）的變化，將每個Mch激發(fā)濃度下的Penh值轉(zhuǎn)換為與生理鹽水（NS）激發(fā)時Penh值的百分比（Mch激發(fā)的Penh值/NS激發(fā)的Penh值×100%），以Penh%表示，作為小鼠氣道反

5、應(yīng)性的評價指標。測定肺功能后再用PBS緩沖液對全肺進行支氣管肺泡灌洗（BAL），對支氣管肺泡灌洗液（BALF）進行細胞學(xué)分析。 結(jié)果：所有哮喘組氣道反應(yīng)性（Penh%）和BALF嗜酸性粒細胞比例（Eos%）與正常組相比均有顯著差異（P<0.05）。In.3d組Eos%和Penh%顯著高于其它霧化激發(fā)組（P<0.05），其中In.3d組BALF Eos%（46.30%±4.55%）顯著高于Ae.2d-20組（31.19%±12.8

6、4%）、Ae.3d-20組（29.00%±12.33%）及Ae.4d-20組（37.08%±8.44%），與Ae.3d-30組（41.17%±8.78%）無顯著差異。In.3d組在霧化乙酰膽堿3.125mg/ml時，氣道反應(yīng)性顯著高于Ae.2d-20組和Ae.4d-20組。In.3d組激發(fā)過程中動物死亡2只，其余各組均無死亡。 結(jié)論： OVA滴鼻和霧化激發(fā)均能成功建立過敏性哮喘小鼠模型，其中滴鼻激發(fā)建立的哮喘模型氣道炎癥及氣道反

7、應(yīng)性升高更為顯著和穩(wěn)定。 第二部分：BCG-DNA和BCG-PSA不同復(fù)方比例對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道反應(yīng)性的影響 目的：觀察BCG核酸（DNA）和多糖（PSA）不同復(fù)方比例對哮喘小鼠氣道炎癥及氣道反應(yīng)性的影響。 方法： 1.哮喘模型制作采用卵蛋白（OVA）致敏和滴鼻激發(fā)，方法同前。Balb/c小鼠隨機分為正常對照組、激素組、哮喘對照組、DNA10組、PSA10組、斯奇康組、PSA/DNA不同復(fù)方比例干預(yù)

8、組。激素組每次激發(fā)前1h腹腔注射地塞米松5mg/kg。斯奇康組和BCG復(fù)方組分干預(yù)組在第一次OVA致敏前7d腹腔注射干預(yù)藥物。正常組不予任何處理。 2.BCG-DNA和BCG-PSA復(fù)方干預(yù)組根據(jù)不同復(fù)方配比進行隨機分組，具體分組如下（表1-1）： 注：P/D=1μg/1μg組簡寫為P/D（1/1）組，其他各組表達相同。 3.激發(fā)后48h采用整體體積描記法檢測小鼠氣道反應(yīng)性，將Penh%作為其氣道反應(yīng)性評價指標。

9、測定肺功能后進行支氣管肺泡灌洗，離心沉淀作細胞學(xué)分析，上清留做細胞因子IFN-γ檢測，肺組織行HE染色病理學(xué)檢查。 結(jié)果： 1.BCG-PSA為主的BCG復(fù)方組分干預(yù)組 BCG-PSA為主的BCG復(fù)方組分干預(yù)組均能顯著抑制哮喘小鼠的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。P/D（10/1）組（41.48%±9.83%）、P/D（40/10）組（43.05%±5.90%）、P/D（100/40）組（42.58%±5.37%）BA

10、LF Eos%還顯著低于斯奇康組（50.55%±14.28%）、DNA10組（50.53%±8.13%）和PSA10組（49.50%±4.35%）（P<0.05）。 2.BCG-DNA為主的BCG復(fù)方組分干預(yù)組 BCG-DNA為主的BCG復(fù)方組分干預(yù)組均可顯著抑制哮喘小鼠的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。P/D（1/10）組（44.15%±7.76）、P/D（10/40）組（43.35%±5.74%）、P/D（40/100）（

11、45.55%±2.45%）組 BALF Eos%顯著低于斯奇康組（50.55%±14.28%）（P<0.05）。P/D（10/40）組還顯著低于DNA10（50.53%±8.13%）和PSA10（49.50%±4.35%）（P<0.05）。P/D（40/100）組在Mch為0.78、3.125、6.25mg/ml時Penh%顯著低于斯奇康組，在Mch6.25-25 mg/ml時Penh%顯著低于DNA10（P<0.05）。 3.

12、 BCG-PSA/BCG-DNA=1：1干預(yù)組 3.1除P/D（1/1）組，其余P/D=1：1組均能顯著抑制哮喘氣道炎癥，P/D（40/40）組（40。5%±7.97%）和P/D（100/100）組（44.35%±4.16%）的氣道炎癥還顯著低于斯奇康組（50.55%±14.28%）、 DNA10（50.53%±8.13%）和 PSA（49.50%±4.35%）（P<0.05）。BCG-PSA/BCG-DNA=1：1干預(yù)組均能顯

13、著抑制哮喘小鼠氣道反應(yīng)性。P/D（40/40）和P/D（100/100）組Penh%顯著低于P/D（1/1）、P/D（10/10）、斯奇康組（P<0.05）。P/D（100/100）組Penh%（Mch6.25-50mg/ml）顯著低于DNA10，Penh%（Mch1.56、50mg/ml）顯著低于PSA10（P<0.05）。 3.2 P/D（40/40）組（24.42pg/ml±3.95pg/ml）和P/D（100/100）組