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1、目的:通過(guò)分離、純化再生肝中各種細(xì)胞,研究大鼠肝再生中肝臟細(xì)胞增殖周期變化及體內(nèi)外細(xì)胞增殖周期異同。
方法:建立大鼠2/3肝切除模型,分別于術(shù)后恢復(fù)0h、12h、24h、27h、30h、33h、36h、39h、42h、48h、60h、72h、96h、120h等時(shí)間點(diǎn)采用原位膠原酶消化和密度梯度離心法分離、純化再生肝臟細(xì)胞;用免疫組織化學(xué)方法鑒定獲得的再生肝臟細(xì)胞;用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定再生肝臟細(xì)胞DNA含量,分析增殖特點(diǎn)。建立再
2、生肝肝細(xì)胞體外培養(yǎng)方法,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)培養(yǎng)細(xì)胞的增殖特點(diǎn)。
結(jié)果:成功分離出再生肝細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞、庫(kù)普弗細(xì)胞、肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、肝卵圓細(xì)胞等,細(xì)胞活性均在95%以上。免疫組化顯示,分離的細(xì)胞純度均在90%以上,符合實(shí)驗(yàn)要求。肝再生中,肝細(xì)胞周期約30h,G1期約為6h,S期約12h,G2/M期約12h。膽管上皮細(xì)胞周期約48h,G0/G1期約為18h,S期約24h,G2/M期約9h。庫(kù)普弗細(xì)胞周期
3、約24h,G0/G1期約為9h,S期約9h,G2/M期約6h。竇內(nèi)皮細(xì)胞周期約33h,G0/G1期約為9h,S期約12h,G2/M期約12h。肝星形細(xì)胞周期約36h,G0/G1期約為12h,S期約12h,G2/M期約12h。肝卵圓細(xì)胞周期約30h,G0/G1期約為12h,S期約12h,C2/M期約6h。
體外培養(yǎng)的再生肝細(xì)胞,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,具有正常肝細(xì)胞功能。培養(yǎng)過(guò)程中再生肝細(xì)胞調(diào)整期稍有變化,細(xì)胞增殖主要發(fā)生在培養(yǎng)2
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