西北地區(qū)奶牛賈第蟲和隱孢子蟲流行病學(xué)調(diào)查及基因型研究.pdf

1、分類號：s855.9單位代碼：10364密級：學(xué)號：12720240安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文西北地區(qū)奶牛賈第蟲和隱孢子蟲流行病學(xué)調(diào)查及基因型研究EpidemiologicalGenotypicResearchofGiardiaCryptospidiuminDairyCattleinNthwestChina研究生：譚啟東指導(dǎo)教師：徐前明副教授合作指導(dǎo)教師：朱興全研究員申請學(xué)位門類級別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)名稱：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：獸醫(yī)寄生

2、蟲與寄生蟲病學(xué)所在學(xué)院：動物科技學(xué)院答辯委員會主席：二零一五年六月摘要賈第蟲（Giardia）和隱孢子蟲（Cryptospidium）是重要的人獸共患寄生性原蟲，主要傳播途徑包括直接接觸或攝入污染的食物和飲水而感染，嚴重威脅著動物生長發(fā)育，給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失，同時，也潛在地威脅著人類健康。針對賈第蟲病和隱孢子蟲病，尚未研發(fā)出有效的藥物和疫苗。掌握奶牛賈第蟲和隱孢子蟲的感染情況、流行特點及種基因型分布等可為防控奶牛賈第蟲病和隱孢

3、子蟲病提供基本依據(jù)。本研究選擇了甘肅省和寧夏回族自治區(qū)3個地市的19個奶牛場，于2012年11月至2014年03月采集了不同年齡階段的奶牛的糞便樣品，對奶牛賈第蟲和隱孢子蟲感染情況進行調(diào)查研究，并對賈第蟲和隱孢子蟲分離株進行分子鑒定和基因分型研究。1.采用福爾馬林乙酸乙酯沉淀法、盧戈氏碘液染色法和飽和蔗糖溶液漂浮法等方法對采集到的2945份奶牛糞便樣品進行顯微鏡檢測，并采用分子生物學(xué)方法對鏡檢為陽性樣品及疑似陽性樣品進行檢測。結(jié)果表明，

4、107份樣品呈賈第蟲陽性的，隱孢子蟲陽性樣品為150份，賈第蟲和隱孢子蟲感染率分別為3.63%和5.09%；賈第蟲在春季的感染率最高，為5.79%，而隱孢子蟲則在秋季感染率最高，為6.96%；在年齡方面，3月齡及以下的奶牛的賈第蟲和隱孢子蟲感染率最高，分別為10.45%和14.01%。2.為掌握奶牛賈第蟲的遺傳特征，通過對107個賈第蟲分離株進行分子鑒定，采用巢式PCR方法特異性擴增TPI基因，測定序列，并在NCBI核酸序列數(shù)據(jù)庫上進行

5、Blast檢索，應(yīng)用ClustalX軟件比對序列以及應(yīng)用Mega軟件構(gòu)建分子進化樹，以期闡明所分離的賈第蟲種類和基因型關(guān)系。結(jié)果表明：PCR擴增產(chǎn)物片段大小為530bp，與預(yù)期結(jié)果相一致。進化樹分析結(jié)果顯示107個分離株均為腸賈第蟲（Giardiaintestinalis），但序列之間存在差異性，其中1個分離株屬于聚集體A，106個分離株屬于聚集體E。3.同樣，對隱孢子蟲分離株進行分子生物學(xué)方法鑒定，采用PCR方法擴增SSUrRNA基因

6、，并對所得序列進行測序和比對分析。PCR擴增結(jié)果顯示目的片段大小為830bp。序列分析發(fā)現(xiàn)在150份奶牛糞便樣品中分離到36株為安氏隱孢子蟲（Cryptospidiumersoni），24株為芮氏隱孢子蟲（Cryptospidiumryanae），70株為牛隱孢子蟲（Cryptospidiumbovis）和20株為微小隱孢子蟲（Cryptospidiumparvum），其中以C.bovis感染率最高。4.此外，利用MLST技術(shù)對奶牛C.