河南省部分地區(qū)家兔隱孢子蟲病流行病學(xué)調(diào)查及兔源隱孢子蟲遺傳特征研究.pdf

1、兔作為經(jīng)濟(jì)動(dòng)物和寵物與人類關(guān)系密切。有文獻(xiàn)報(bào)道兔易感染人獸共患的隱孢子蟲兔基因型,對(duì)人類的健康是一種潛在威脅。國(guó)內(nèi)目前有關(guān)兔源隱孢子蟲的分子資料極少,河南省到目前為止還未見完整的有關(guān)兔隱孢子蟲病流行病學(xué)方面資料,因此為掌握河南省兔隱孢子蟲病流行病學(xué)資料和兔源隱孢子蟲種類和基因型,本研究對(duì)河南省部分地區(qū)兔隱孢子蟲病進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,并對(duì)檢查到的隱孢子蟲從形態(tài)學(xué)、動(dòng)物感染試驗(yàn)、卵囊排出規(guī)律和核糖體小亞基(18S rRNA)基因、肌動(dòng)蛋白(

2、actin)基因和卵囊壁蛋白(COWP)基因擴(kuò)增和生物信息學(xué)分析等方面進(jìn)行了種類鑒定及其生物學(xué)特性研究,鑒定出河南省兔源隱孢子蟲流行種類和基因型,確定河南兔源隱孢子蟲分離株和其它種類隱孢子蟲之間的分子種系進(jìn)化關(guān)系,為防控人獸共患隱孢子蟲病提供了理論依據(jù)。
　　 為了解河南省兔腸道寄生蟲感染情況,應(yīng)用反復(fù)水洗滌沉淀法、飽和蔗糖溶液漂浮法、改良抗酸染色法和盧戈氏碘液染色法等寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法對(duì)在8個(gè)規(guī)?；脠?chǎng)采集的共1081份糞樣進(jìn)行

3、了寄生蟲檢查。共檢出蟲卵和卵囊5類,其中原蟲3類(球蟲、隱孢子蟲、賈第蟲)、線蟲2類(類圓線蟲和兔栓尾線蟲)。本次調(diào)查中共發(fā)現(xiàn)732份糞便樣品為寄生蟲陽(yáng)性,寄生蟲總感染率為67.72％(732/1081)；8個(gè)兔場(chǎng)的不同種類寄生蟲平均感染率分別為:隱孢子蟲3.42％,球蟲64.11％,賈第蟲5.27％,兔栓尾線蟲1.39％,類圓線蟲8.97％。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)兔寄生蟲混合感染現(xiàn)象比較嚴(yán)重,其中兩種寄生蟲混合感染現(xiàn)象較為普遍。
　　

4、為掌握河南省兔隱孢子蟲流行病學(xué)資料,應(yīng)用飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法對(duì)分布在河南省5個(gè)地區(qū)的8個(gè)兔場(chǎng)共1081份兔糞樣進(jìn)行檢查,并對(duì)兔隱孢子蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明:查出陽(yáng)性樣品37份,隱孢子蟲總陽(yáng)性率為3.42％(37/1081):1～3月齡兔和小于1月齡的未斷奶兔的感染率最高,分別達(dá)10.93％和4.11％。從37份陽(yáng)性樣品中分離到的卵囊大小和形態(tài)結(jié)構(gòu)基本一致,卵囊大小為4.426～5.163μm×3.934～4.6

5、72μm,平均為4.91μmx4.28μm,卵囊形狀指數(shù)平均為1.15。根據(jù)隱孢子蟲卵囊形態(tài)分析結(jié)果,將發(fā)現(xiàn)于兔的隱孢子蟲卵囊初步鑒定為微小隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum)或隱孢子蟲兔基因型(Cryptosporidium rabbit genotype),具體有待分子鑒定。同時(shí)發(fā)現(xiàn)兔隱孢子蟲感染存在年齡差異。
　　 動(dòng)物感染試驗(yàn)表明,兔隱孢子蟲既可感染免疫抑制的30日齡肉兔,也可感染免疫正常的30日齡肉

6、兔,只是隱孢子蟲感染后的潛伏期不同,分別為2d和8d；感染后均出現(xiàn)2個(gè)排卵囊高峰期,但第一個(gè)高峰期不太明顯；排卵囊持續(xù)期(顯露期)也不同,分別為5d和8d。
　　 根據(jù)發(fā)表的隱孢子蟲18SrRNA基因、actin基因和COWP基因序列建立PCR方法,在國(guó)內(nèi)首次對(duì)兔源隱孢子蟲分離株的18SrRNA、actin基因和COWP基因成功擴(kuò)增并測(cè)序,測(cè)序后的序列用Blast在NCBI核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)搜索同源序列,然后利ClustalX1.8

7、1、Phylip3.64和DNAstar4.0等生物學(xué)軟件對(duì)序列進(jìn)行比對(duì)、構(gòu)建分子進(jìn)化樹以及同源性分析。根據(jù)在18SrRNA基因位點(diǎn)、actin基因位點(diǎn)和COWP基因位點(diǎn)種系進(jìn)化關(guān)系分析,河南兔感染的隱孢子蟲為隱孢子蟲兔基因型(Cryptosporidium rabbit genotype)。
　　 有關(guān)兔隱孢子蟲的分子特性研究,國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。本研究在國(guó)內(nèi)外首次對(duì)隱孢子蟲兔基因型(Cryptosporidium rabbit