中國部分地區(qū)馬屬動物隱孢子蟲、賈第蟲分子流行病學(xué).pdf

1、隱孢子蟲是一種重要的人獸共患原蟲病病原，可以感染260多種脊椎動物，主要引起腸胃炎和急慢性腹瀉為主的隱孢子蟲病，已在106個國家的人群中發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲病的流行。隱孢子已成為人類6種常見腹瀉病的病原之一，同時它也是150種水傳疾病病原中最重要的一種。很多動物是人獸共患隱孢子蟲的宿主和人感染隱孢子蟲的來源。賈第蟲是全球分布的脊椎動物普遍存在的腸道寄生蟲，該蟲主要是通過食物或者飲水傳播，可引起動物腹瀉，也是人類常見的腹瀉病原之一。多種動物如家養(yǎng)

2、和野生反芻動物及犬、貓、兔及其他嚙齒動物等是人獸共患賈第蟲的貯存宿主，因此，動物的隱孢子蟲和賈第蟲流行情況和基因型分布受到人們的重視。
　　為研究我國馬屬動物中隱孢子蟲和賈第蟲臨床感染情況及其公共衛(wèi)生意義，從2008-2011年間，從河南，山東，內(nèi)蒙古，甘肅，河北，四川等省區(qū)的部分地區(qū)分別采集驢、馬、騾糞便樣品1063、203、36份，經(jīng)飽和蔗糖溶液漂浮法和盧戈氏碘液染色法檢查，共發(fā)現(xiàn)寄生蟲陽性糞樣921份，其中球蟲、蛔蟲、圓線蟲

3、、絳蟲、其他寄生蟲卵/卵囊/包囊感染率分別為7.14％、12.6％、55.99％、3.53％、4.53％，兩種及其以上寄生蟲混合感染率2.58％。不同來源的馬屬腸道寄生蟲的陽性率從31.94％-100％之間，總陽性率為70.74％，各地馬屬動物腸道寄生蟲混合感染率從0-70％不等。內(nèi)蒙古軍馬場的軍馬感染率最低為31.94％，混合感染率為2.08％。騾的線蟲和隱孢子蟲的感染率較馬、驢的低。6月齡以下的馬屬動物隱孢子蟲和線蟲的感染率分別為2

4、9.21％和86.14％，較612月齡和成年動物高;集中養(yǎng)殖方式馬屬動物各種寄生蟲的感染率均高于農(nóng)村散養(yǎng)動物。本次調(diào)查共檢出隱孢子蟲疑似樣品222(17.5％)份，感染強(qiáng)度較低，以幼齡馬屬動物感染率較高。馬屬動物的隱孢子蟲近圓形，大小在5μm左右。
　　用基于SSUrRNA基因的PCR-RFLP分析鑒定以及DNA序列分析鑒定技術(shù)對上述222份隱孢子蟲陽性或疑似樣品進(jìn)行基因分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，222份陽性和疑似樣品有114份擴(kuò)增出目的條

5、帶，占調(diào)查總數(shù)的8.76％。其中51個樣品進(jìn)行序列測定。經(jīng)RFLP分析和種系發(fā)育分析，共鑒定出6個隱孢子蟲種類/基因型:Cryptosporidiumdonkeygenotype，C.parvum，horsegenotype，C.cuniculus基因型，Cryptosporidiumpigl，ferretgenotype。其中新基因型有86個樣品，donkeygenotype為優(yōu)勢種類，其次為C.parvum共12個樣品。2個樣品屬于

6、horsegenotype，2個為Ccunwulus，2個為Cryptosporidiumpigl。在12個C.parvum樣品中，驢的樣品占到9份為72.73％，馬的樣品為27.27％，表明馬和驢的隱孢子蟲均有人獸共患隱孢子蟲種類。donkeygenotype是6月齡以下驢駒感染的主要隱孢子蟲種類，兩個horsegenotype樣品均來自驢駒。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)驢是自然感染隱孢子蟲C.cuniculus和ferretgenotype的新宿主。

7、
　　經(jīng)SSUrRNA基因擴(kuò)增鑒定的陽性樣品進(jìn)一步用gp60基因進(jìn)行亞型分型，發(fā)現(xiàn)獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物分屬三個不同的亞家族:Ⅱd、Ⅵ和一個新的亞型家族，按照gp60亞型的命名原則將新亞型命名為Ⅻ;三種不同亞家族中，共發(fā)現(xiàn)四個亞型:horsegenotype家族Ⅵ中兩個樣品均是ⅥA11G3亞型，Ⅱd亞家族中兩個樣品均屬ⅡdA19G1，在新家旅中，有兩個樣品屬于ⅫA16亞型，其余19個都為ⅫA16G1亞型。所屬Ⅻ家族樣品數(shù)量為21個，占84

8、％，其余兩個亞型所占比例各為8％，和基于SSUrRNA的分類結(jié)果一樣，donkeygenotype為優(yōu)勢種類。其中horsegenotype、ⅡdA19G1是人獸共患隱孢子。基因亞型ⅫA16、ⅫA16G1是新發(fā)現(xiàn)的驢隱孢子蟲基因亞型，而且在成功擴(kuò)增的25個gp60樣品中，ⅫA16G1是優(yōu)勢亞型，該亞型對動物的致病力、是否對人具有感染性尚不明確，需要進(jìn)一步的試驗(yàn)探索。
　　對部分驢糞樣品進(jìn)行賈第蟲TPI基因和GDH基因擴(kuò)增并測序，共

9、有4份TPI基因陽性，7份GDll基因陽性，經(jīng)搜索同源序列、ClustalX1.83比對、phylip3.69進(jìn)化分析，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增出的4個TPI序列中的3個屬于聚集體BIV，與聚集體BIV僅有2個堿基的變異;另一個TPI陽性樣品屬于聚集體AI。擴(kuò)增的7個GDH序列均屬聚集體B1V，兩個基因位點(diǎn)分析的共8個賈第蟲樣品均屬于人獸共患的聚集體A、B，這與文獻(xiàn)報道的馬的賈第蟲主要種類為聚集體E有明顯差別。
　　以上研究探明了我國部分地區(qū)馬屬

10、動物腸道寄生蟲感染總陽性率70.74％，其中圓線蟲，球蟲，蛔蟲分別為55.99％，7.14％、12.6％。隱孢子蟲陽性和疑似陽性率為17.5％，經(jīng)SSUrRNA基因鑒定的陽性率為8.76％。馬屬動物尤其是驢隱孢子蟲基因分型顯示有6個隱孢子蟲種類/基因型，其中donkeygenotype為新基因型，同時也是我國驢感染的優(yōu)勢蟲種，C.parv，um，horsegenotype為人獸共患種類/基因型，而C.cumiculus和ferretge

11、notype的檢出表明驢為這兩個種類的新宿主。gp60亞型分析共發(fā)現(xiàn)3個不同亞型家族，4個亞型:ⅡdA19G1、ⅥA11G3、ⅫA16、ⅫA16G1，后兩者是首次發(fā)現(xiàn)的驢隱孢子蟲亞型。馬屬動物賈第蟲基因分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩個基因型:聚集體AI和BIV，后者是優(yōu)勢亞型。盡管donkeygenotype生物學(xué)特性如是否具有人獸共患性尚不清楚，但C.parvum和horsegenotype的及賈第蟲聚集體AI和BIV的發(fā)現(xiàn)表明我國馬屬動物是人隱孢子