新型漢防己甲素的衍生物合成及活性研究.pdf

1、目的：
　　漢防己甲素是從粉防己根中提取的一種生物堿，有多方面的藥理作用?；跐h防己甲素優(yōu)異的抗腫瘤活性，對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，有希望合成出更多活性更好的抗腫瘤藥物。蛋白質(zhì)酪氨酸激酶家族(PTKs)是控制細(xì)胞生長和分化重要的物質(zhì)，PTKs的活化是啟動(dòng)DNA合成和細(xì)胞增殖中多細(xì)胞反應(yīng)的關(guān)鍵信號(hào)，因此通過抑制蛋白酪氨酸激酶的活性可以達(dá)到抗腫瘤的目的。本文首先對漢防己甲素進(jìn)行5位的選擇性溴代，得到中間體5-溴漢防己甲素，之后采用鈀催化的Su

2、zuki偶聯(lián)反應(yīng)與一系列硼酸衍生物合成21(1-21)個(gè)新的化合物。采用CCK8法對目標(biāo)化合物進(jìn)行初步的活性篩選，之后采用MTT法對活性大于50％的化合物進(jìn)行復(fù)篩。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法測定了化合物對c-Met、ALK、FGFR1、RET、EGFR、ErbB2、KDR激酶的抑制率，以期為抗腫瘤藥物的研究提供參考。
　　方法：
　　1.本文以漢防己甲素為先導(dǎo)化合物，在酸性條件下反應(yīng)得到中間體5-溴漢防己甲素，之后在

3、鈀催化劑的作用下與一系列硼酸衍生物進(jìn)行Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)合成21(1-21)個(gè)新的化合物。通過熔點(diǎn)測定、薄層色譜、ESI-MS、1HNMR、13CNMR對目標(biāo)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　2.體外抗腫瘤活性試驗(yàn)首先采用CCK8法對目標(biāo)化合物的體外抗腫瘤活性進(jìn)行初篩，抑制率大于50%的采用MTT法進(jìn)行復(fù)篩。以母體藥物漢防己甲素為陽性藥物，考察了目標(biāo)化合物對A549(人肺癌細(xì)胞株)、HL60(人早幼粒白血病細(xì)胞株)的抑制活性，從中篩選出

4、活性較好的化合物。
　　3.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法測定了化合物對c-Met、ALK、FGFR1、RET、EGFR、ErbB2、KDR激酶的抑制率。
　　結(jié)果：
　　1.合成了21個(gè)漢防己甲素衍生物，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定，均為目標(biāo)化合物。
　　2.體外抗腫瘤活性結(jié)果表明：化合物2、3、5-9、12-18濃度為10μM時(shí)對兩種腫瘤細(xì)胞的抑制率均大于50%，對于HL60細(xì)胞，大多數(shù)篩選出的化合物的抑制率與母體藥物相當(dāng)

5、，對于A549細(xì)胞，上述化合物的抑制率均強(qiáng)于母體化合物。采用MTT法，對篩選出的化合物進(jìn)行活性復(fù)篩，結(jié)果表明，對于HL60細(xì)胞，化合物3、5、6、9、16和18的抗腫瘤活性均強(qiáng)于母體化合物，化合物3、5、6、9的抗腫瘤活性約為母體化合物的2倍；對于A549細(xì)胞，初篩出抑制率大于50%的大多數(shù)化合物的IC50值均小于母體化合物，且其中化合物6和化合物13的抗腫瘤活性約為母體化合物的3倍，化合物5約為母體化合物的2倍，說明篩選出的化合物的抗

6、腫瘤活性明顯增強(qiáng)。構(gòu)效關(guān)系分析得：化合物中引入芐氧基可能會(huì)增強(qiáng)對HL60細(xì)胞的抗腫瘤活性和選擇性；雜環(huán)可能會(huì)增強(qiáng)藥物的抗腫瘤活性，與文獻(xiàn)報(bào)道相符；乙酰基在苯環(huán)的對位時(shí)可能有助于改善母體化合物的活性；烷氧基在苯環(huán)的對位時(shí)，化合物的活性可能與烷氧鏈的長度有關(guān)，且鏈越短可能對A549細(xì)胞的選擇性和活性越強(qiáng)。
　　3.酶活抑制試驗(yàn)表明：化合物6、16、17濃度為10μM時(shí)對FGFR1激酶有一定的抑制活性?；衔?不但對兩種細(xì)胞的抑制活性均