抑制腦死亡大鼠JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)供腎免疫原性及移植效果的影響.pdf

1、目前腎臟移植面臨供體嚴(yán)重缺乏的問(wèn)題,充分利用包括腦死亡供體在內(nèi)的邊緣供體得到了廣泛重視。但是在腦死亡過(guò)程中,機(jī)體因?yàn)槿毖俟嘧p傷和免疫系統(tǒng)的激活導(dǎo)致了供腎質(zhì)量不佳,使移植后各類排斥反應(yīng)增加、移植腎存活率降低、受體存活時(shí)間減少。JNK信號(hào)通路在細(xì)胞應(yīng)激、缺血缺氧損傷和免疫系統(tǒng)激活等過(guò)程中發(fā)揮重要作用,使用選擇性JNK抑制劑能夠阻止c-Jun的磷酸化,阻礙phospho-Jun聚集和c-Jun的轉(zhuǎn)錄,減少大量凋亡相關(guān)基因表達(dá),減輕缺血再灌

2、注損傷,同時(shí)能減少多種炎癥介質(zhì)的釋放,并抑制T淋巴細(xì)胞增殖及其介導(dǎo)的同種免疫反應(yīng),從而達(dá)到降低腎臟的免疫原性、減少急慢性排斥反應(yīng)發(fā)生率、延長(zhǎng)移植腎存活時(shí)間的目的。本實(shí)驗(yàn)建立穩(wěn)定可靠的大鼠腦死亡模型,首次通過(guò)抑制其JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路,以期減輕缺血缺氧和炎性因子釋放等過(guò)程對(duì)供體腎臟的損傷作用,減少排斥反應(yīng)發(fā)生、延長(zhǎng)移植物存活率和移植受體的存活時(shí)間。本課題通過(guò)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中反映腎臟缺血再灌注損傷和免疫激活狀態(tài)的各項(xiàng)指標(biāo)以及觀察移植物的存

3、活狀況來(lái)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)效果,為改善腦死亡供體供腎質(zhì)量尋找新穎有效的途徑。
　　 第一部分大鼠腦死亡模型的建立
　　 目的
　　 在器官移植研究中,大鼠腦死亡模型被廣泛使用。但是腦死亡過(guò)程中,突然增加的顱內(nèi)壓會(huì)造成血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定,進(jìn)而影響外周器官血供,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。為了改變這種情況,我們建立了一種可重復(fù)的漸進(jìn)發(fā)生的大鼠腦死亡模型。
　　 方法
　　 實(shí)驗(yàn)對(duì)象為40只成年雄性Wistar大鼠,

4、200-250g。在大鼠顱內(nèi)放置Forgarty導(dǎo)管,在EEG和血壓監(jiān)測(cè)下逐漸擴(kuò)張導(dǎo)管,使顱內(nèi)壓升高并最終導(dǎo)致腦死亡,給腦死亡大鼠機(jī)械通氣6小時(shí),討論其MAP變化、并發(fā)癥發(fā)生率和模型制作的成功率
　　 結(jié)果
　　 40只大鼠中的大部分(75％)可以被用作供體。在一個(gè)短暫的血壓急劇升高過(guò)程后,平均動(dòng)脈壓可以維持在80-100mmHg,與對(duì)照組沒(méi)有明顯差異。
　　 結(jié)論
　　 本實(shí)驗(yàn)所建立的是一種有對(duì)照的漸進(jìn)

5、腦死亡大鼠模型,這種模型能保持供體的血壓相對(duì)穩(wěn)定,模型制作的成功率較高,主要的并發(fā)癥包括不可逆低血壓等。這個(gè)模型適合與腦死亡有關(guān)的器官移植相關(guān)的研究。
　　 第二部分大鼠腎移植手術(shù)技術(shù)的改進(jìn)
　　 目的
　　 大鼠腎移植模型是器官移植和腎臟相關(guān)疾病研究中常用的動(dòng)物模型,目前已有多種建模方式,但這些模型在手術(shù)時(shí)間、移植效果等方面都存在各種問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)擬建立一種簡(jiǎn)便、安全、成功率高的單側(cè)供腎大鼠腎移植模型。
　

6、　 方法
　　 Wistar大鼠作供體,SD大鼠作為受體,各60只。切取供體左側(cè)腎臟作為供腎,分別以供體腹主動(dòng)脈、左腎靜脈與受體腹主動(dòng)脈、下腔靜脈端側(cè)吻合,供腎輸尿管以5-0帶針線牽引插入膀胱,吻合縫針破口完成尿路重建。腎包膜下切除受體原有雙腎。統(tǒng)計(jì)手術(shù)時(shí)間和移植成功率。
　　 結(jié)果
　　 手術(shù)時(shí)間100-140分鐘。其中供腎熱缺血時(shí)間約8-10秒鐘,冷缺血時(shí)間約40-60分鐘。移植成功率為85％,失敗原因分別

7、為吻合口狹窄伴血栓(6.67％)、吻合口出血(5％),感染(1.67％),不明原因(1.67％)。
　　 結(jié)論
　　 本實(shí)驗(yàn)建立的建模方法簡(jiǎn)便、可靠,明顯縮短熱缺血及尿路重建的時(shí)間,減少相關(guān)并發(fā)癥,并可以用于其他移植模型。
　　 第三部分抑制腦死亡大鼠JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)供腎免疫原型及移植效果的影響
　　 目的
　　 觀察抑制腦死亡大鼠的JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)供腎的缺血再灌注損傷和免疫激活損傷的影響

8、,以期達(dá)到降低供腎免疫原性,提高移植效果的目的。
　　 方法
　　 建立大鼠腦死亡模型后給予JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制劑SP600125,將供腎移植給受體大鼠,在移植后7天內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)通過(guò)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中反映腎臟缺血再灌注損傷和免疫激活狀態(tài)的各項(xiàng)指標(biāo)以及觀察移植物的存活狀況來(lái)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)效果,最終評(píng)估在腦死亡大鼠使用JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制劑對(duì)供腎免疫原性和移植效果的影響
　　 結(jié)果
　　 抑制腦死亡大鼠JNK