核因子κB抑制劑PDTC對腦死亡豬腎臟免疫原性的影響.pdf

1、腎移植是治療終末期腎病的最有效方法。然而，全國可供移植的器官只能滿足10％～20％的患者需要。供腎來源短缺使得很多終末期腎病患者只能靠血液透析維持生命，約一半需要腎移植的病人在等待供體的過程中死亡。利用腦死亡供體器官進行移植是緩解器官來源短缺的有效手段。但研究顯示在人類白細胞抗原相容的前提下，活體非親屬供者腎臟3年存活率達80％以上，腦死亡供者僅為70％。活體非親屬供腎移植，與腦死亡供者比較，無論手術技術、治療方法以及遺傳背景上都沒有明

2、顯優(yōu)勢，但其效果要優(yōu)于腦死亡者，推測腦死亡在其中發(fā)揮了極為重要的作用。有報道顯示腦死亡后腎臟主要組織相容性抗原-Ⅱ(majorhistocompatibility antigen-Ⅱ．MHC-Ⅱ)表達升高，腎臟免疫原性明顯增強，有利于受體免疫系統(tǒng)的識別，更易于與宿主產(chǎn)生免疫應答，發(fā)生排斥反應。核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)是一種具有多向性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子，控制著多種炎癥和免疫相關基因的表達

3、，被認為是調(diào)控機體炎癥反應的總源頭。VanDer Hoeven等人研究發(fā)現(xiàn)大鼠腦死亡時‘腎臟組織NF-κB表達增高，同時其調(diào)控的免疫相關基因如黏附分子等表達也增高，炎性細胞浸潤增加，腎臟發(fā)生炎性損傷。吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)是對NF-KB活性有強烈抑制作用的一種抗氧化劑。近年來，在急性暈癥胰腺炎、器官缺血再灌注損傷等動物模型中都發(fā)現(xiàn)其通過抑制NF-κB的活性而發(fā)揮對器官的

4、保護作用。但腦死亡后腎臟免疫原性增強的機制是什么，它與NF-κB的活化是否有關，日前文獻尚未見文獻報道。探討這些問題對于改善腎臟移植的效果，提高腎臟移植的水平有重要意義。本實驗擬應用間斷緩慢顱內(nèi)加壓法制作豬腦死亡模型，并應用PDTC進行干預，通過觀察腦死亡狀態(tài)下PDTC干預前后腎臟免疫原性的改變，探討NF-KB在腦死亡腎臟免疫原性改變中可能發(fā)揮的作用，為臨床腎移植過程中通過降低腦死亡供體腎臟免疫原性進而提高移植存活率提供理論依據(jù)。

5、 目的；通過檢測腦死亡狀態(tài)下應用NF-KB抑制劑PDTC前后豬腎臟組織NF-KB、MHC-Ⅱ水平變化，探討NF-KB在腦死亡后。腎臟免疫原性改變中的作用，為臨床中通過降低腦死亡供體腎臟免疫原性進而提高移植存活率提供理論依據(jù)。 方法；健康長白豬18頭，雌雄不限，隨機分為3組，即對照組(C組)、腦死亡組(B組)和保護組(P組)，每組6頭。應用改進的緩慢間斷顱內(nèi)加壓法建立腦死亡模型，通過呼吸及循環(huán)支持維持豬腦死亡狀態(tài)24小時。B組和

6、P組動物于腦死亡建成后6、12和24h取血清及腎下極組織，ELISA法檢測血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平變化；實時熒光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR)法檢測腎臟組織NF-KB mRNA水平變化；免疫組化法觀察NF-KB p65亞基及MHC-Ⅱ分子DR位點蛋白表達的變化；光鏡下觀察腎臟組織結構的變化。C組僅行顱內(nèi)置管，不建立腦死亡，分別于上述各對應時間點留取血清和腎臟組

7、織檢測相應指標變化。 結果 1．血清炎癥因子變化在6、12、24h三個時間點，C組血清TNF-α水平分別為11.01±0.90、10.54±0.63和10.95±0.76pg/ml，IL-1β水平分別為4.80±0.50、4.89±0.49和4.98±0.45pg/ml，IL-6水平分別為11.55±0.79、11.34±0.84和11.53±0.57pg/ml；B組血清TNF-α水平分別為20.21±1.12、25.1

8、6±1.04和34.99±0.88pg/ml，IL-1β水平分別為10.93±0.76、14.80±0.68和18.01±1.02pg/ml，IL-6水平分別為17.08±0.83、25.29±1.47和34.10±2.05pg/ml；P組血清TNF-α水平分別為15.68±0.77、21.52±0.58和29.44±1.51pg/ml，IL-1β水平分別為8.00±0.64、11.27±0.77和14.30±0.46pg/ml，IL-

9、6水平分別為14.23±0.67、19.43±1.29和24.77±1.52pg/ml。C組各時間點之間血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平各自比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)：B組及P組組內(nèi)TNF-α、IL-1β、IL-6分別進行后一時間點與前一時間點比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；各對應時間點TNF-α、IL-1β、IL-6分別進行組間比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 死亡時間延長呈上升趨勢，提示腦