脂多糖對Balb-c鼠TSHb剪接變體基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 Vincent BH等人發(fā)現(xiàn)C57BL/6小鼠的垂體、甲狀腺、骨髓組織中表達(dá)一種TSHβ剪接變體，它的轉(zhuǎn)錄起始于第4內(nèi)含子3’端的27個(gè)堿基，因此它缺少第4外顯子，含有第5外顯子的全部編碼區(qū)。隨后Jeremy S等又報(bào)道了人的垂體、外周血和甲狀腺中也同樣表達(dá)TSHβ剪接變體。它和小鼠的TSHβ剪接變體很相似，含有內(nèi)含子2的27個(gè)核苷酸和第3外顯子全部編碼區(qū)。它是首次被發(fā)現(xiàn)含有部分內(nèi)含子的TSHβ剪接體，并體外實(shí)驗(yàn)初

2、步證實(shí)小鼠的TSHβ剪接變體具有生物學(xué)活性。但是，目前為止，對于它的表達(dá)部位、生理及病理學(xué)意義還不清楚。我們在確認(rèn)TSHβ剪接變體在Balb/c小鼠垂體、甲狀腺、骨髓、脾、外周血和淋巴結(jié)中表達(dá)的情況下，利用LPS制備小鼠內(nèi)毒素性全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)模型，通過檢測TSHβ剪接變體在垂體、甲狀腺、骨髓、脾組織中的表達(dá)變化，探討機(jī)體發(fā)生感染時(shí)TSHβ剪接

3、變體對調(diào)節(jié)循環(huán)中甲狀腺激素水平的作用。
　　 方法：
　　 本實(shí)驗(yàn)首先選擇36只雌雄各半的Balb/c小鼠，7-8周齡，隨機(jī)分為6組，每組6只，分別為：0h組，6h組，12h組，24h組，48h組，72h組。0h組：腹腔注射生理鹽水；其它各組均經(jīng)腹腔注射LPS，3mg/kg體重。根據(jù)設(shè)置的時(shí)間組，于注射后取動物全血，采用RIA法和ELISA法分別檢測小鼠血清中甲狀腺激素和促甲狀腺激素水平。
　　 使用PCR技術(shù)對

4、TSHβ剪接變體在Balb/c小鼠垂體、甲狀腺、骨髓、脾、外周血、淋巴結(jié)中表達(dá)進(jìn)行檢測，并對甲狀腺該基因的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序。用SYRRGREEN實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分析不同處理時(shí)間下TSHβ剪接變體基因mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 0h血清TT4水平為24.5875nmol/L，與其相比其它各組均下降(P<0.01)，24h下降最明顯為9.3283nmol/L，48h開始回復(fù)，直至72h為18.696nmol/L仍

5、未回復(fù)到正常水平。TSH水平?jīng)]有明顯變化。
　　 PCR結(jié)果顯示垂體、甲狀腺、骨髓、脾、外周血、淋巴結(jié)中表達(dá)TSHβ剪接變體，但除垂體外其它組織都不表達(dá)天然型TSHβ。
　　 骨髓中TSHβ剪接變體表達(dá)于6h，12 h，24h較0h下降，48h恢復(fù)正常，0h為(1.000±0.000)，6h為(0.511027±0.10390)(p<0.01)，12h為(0.36788±0.06024)(p<0.01)，24h為(0.1

6、98357±0.03266)(p<0.01)。甲狀腺中TSHβ剪接變體表達(dá)于6h較0h升高，0h為(1.000±0.000)，6h為(10.43319±4.86834)(9<0.01)。其它各時(shí)間點(diǎn)較0h比較甲狀腺中TSHβ剪接變體表達(dá)均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。垂體中TSHβ剪接變體及天然型TSHβ表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)均未見明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 1.PCR結(jié)果顯示Balb/c小鼠的垂體、甲狀腺、骨髓、脾、外周血、淋巴結(jié)組織中均

7、表達(dá)TSHβ剪接變體，但天然型TSHβ僅在垂體中表達(dá)。
　　 2.腹腔注射LPS(3mg/kg體重)可降低循環(huán)中甲狀腺激素水平，但對TSH沒有顯著影響。
　　 3.LPS使Balb/c小鼠甲狀腺組織中TSHβ剪接變體mRNA的表達(dá)明顯升高，但LPS抑制骨髓TSHβ剪接變體mRNA的表達(dá)，提示TSHβ剪接變體參與炎癥反應(yīng)過程，在免疫-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中有重要作用，免疫系統(tǒng)來源的TSHβ剪接變體的生理病理學(xué)作用和調(diào)節(jié)機(jī)制有待進(jìn)