脂多糖對Balb-c鼠TSHb剪接變體基因表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 Vincent BH等人發(fā)現(xiàn)C57BL/6小鼠的垂體、甲狀腺、骨髓組織中表達一種TSHβ剪接變體，它的轉錄起始于第4內含子3’端的27個堿基，因此它缺少第4外顯子，含有第5外顯子的全部編碼區(qū)。隨后Jeremy S等又報道了人的垂體、外周血和甲狀腺中也同樣表達TSHβ剪接變體。它和小鼠的TSHβ剪接變體很相似，含有內含子2的27個核苷酸和第3外顯子全部編碼區(qū)。它是首次被發(fā)現(xiàn)含有部分內含子的TSHβ剪接體，并體外實驗初

2、步證實小鼠的TSHβ剪接變體具有生物學活性。但是，目前為止，對于它的表達部位、生理及病理學意義還不清楚。我們在確認TSHβ剪接變體在Balb/c小鼠垂體、甲狀腺、骨髓、脾、外周血和淋巴結中表達的情況下，利用LPS制備小鼠內毒素性全身炎癥反應綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)模型，通過檢測TSHβ剪接變體在垂體、甲狀腺、骨髓、脾組織中的表達變化，探討機體發(fā)生感染時TSHβ剪接

3、變體對調節(jié)循環(huán)中甲狀腺激素水平的作用。
　　 方法：
　　 本實驗首先選擇36只雌雄各半的Balb/c小鼠，7-8周齡，隨機分為6組，每組6只，分別為：0h組，6h組，12h組，24h組，48h組，72h組。0h組：腹腔注射生理鹽水；其它各組均經腹腔注射LPS，3mg/kg體重。根據設置的時間組，于注射后取動物全血，采用RIA法和ELISA法分別檢測小鼠血清中甲狀腺激素和促甲狀腺激素水平。
　　 使用PCR技術對

4、TSHβ剪接變體在Balb/c小鼠垂體、甲狀腺、骨髓、脾、外周血、淋巴結中表達進行檢測，并對甲狀腺該基因的擴增產物進行測序。用SYRRGREEN實時熒光定量PCR法分析不同處理時間下TSHβ剪接變體基因mRNA表達。
　　 結果：
　　 0h血清TT4水平為24.5875nmol/L，與其相比其它各組均下降(P<0.01)，24h下降最明顯為9.3283nmol/L，48h開始回復，直至72h為18.696nmol/L仍

5、未回復到正常水平。TSH水平沒有明顯變化。
　　 PCR結果顯示垂體、甲狀腺、骨髓、脾、外周血、淋巴結中表達TSHβ剪接變體，但除垂體外其它組織都不表達天然型TSHβ。
　　 骨髓中TSHβ剪接變體表達于6h，12 h，24h較0h下降，48h恢復正常，0h為(1.000±0.000)，6h為(0.511027±0.10390)(p<0.01)，12h為(0.36788±0.06024)(p<0.01)，24h為(0.1

6、98357±0.03266)(p<0.01)。甲狀腺中TSHβ剪接變體表達于6h較0h升高，0h為(1.000±0.000)，6h為(10.43319±4.86834)(9<0.01)。其它各時間點較0h比較甲狀腺中TSHβ剪接變體表達均沒有統(tǒng)計學意義。垂體中TSHβ剪接變體及天然型TSHβ表達各時間點均未見明顯變化。
　　 結論：
　　 1.PCR結果顯示Balb/c小鼠的垂體、甲狀腺、骨髓、脾、外周血、淋巴結組織中均

7、表達TSHβ剪接變體，但天然型TSHβ僅在垂體中表達。
　　 2.腹腔注射LPS(3mg/kg體重)可降低循環(huán)中甲狀腺激素水平，但對TSH沒有顯著影響。
　　 3.LPS使Balb/c小鼠甲狀腺組織中TSHβ剪接變體mRNA的表達明顯升高，但LPS抑制骨髓TSHβ剪接變體mRNA的表達，提示TSHβ剪接變體參與炎癥反應過程，在免疫-內分泌網絡調節(jié)中有重要作用，免疫系統(tǒng)來源的TSHβ剪接變體的生理病理學作用和調節(jié)機制有待進